Biopolym. Cell. 2012; 28(6):434-440.
Структура та функції біополімерів
Проліл-тРНК синтетаза із Thermus thermophilus є ферментом еукаріотичного типу, але аміноацилює прокаріотичну тРНКPro
1, 2Яремчук А. Д., 1Бояршин К. С., 1, 2Тукало М. А.
  1. Державна ключова лабораторія молекулярної і клітинної біології
    Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
    вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680
  2. ЄМБЛ
    вул. Жюлі Горовиць, 6, Гренобль, Франція
Мета. Клонування, секвенування та експресія гена проліл-тРНК синтетази, ферменту IIa класу, з бактерії екстремального термофіла T. thermophilus HB8 (ProRSTT). Методи. Пошук гена Pro RSTT проводили методом Саузерн-блот-гібридизації з хромосомної ДНК, де як зонди використано мічені дигоксигеніном ПЛР- фрагменти ДНК. Результати. Ген ProRSTT HB8 клоновано і секвеновано. Відкрита рамка зчитування гена кодує білок довжиною 477 амінокислотних залишків, який має більшу гомологію з еукаріотичними і архейними, ніж з бактерійними ProRSs. Дані філогенетичного аналізу засвідчують, що існують дві різні структурні групи ProRS, які розійшлися на початку еволюції: 1) еукаріотично/архейний тип, що характеризується відсутністю вставки в області між мотивами 2 і 3 та наявністю додаткового C-кінцевого домену до звичайного для класу IIa антикодон-зв’язувального домену та 2) прокаріотичний тип – з дуже великими вставками між мотивами 2 і 3 та без додаткового C-кінцевого домену. Висновки. З використанням експресуючого вектора ProRSTT суперпродуковано в клітинах Escherichia coli і термостабільний фермент очищено до високого ступеня гомогенності. Незважаючи на приналежність до еукаріотичного типу, ProRSTT показала здатність з високою специфічністю аміноацилювати бактерійну тРНК, у той час як активність відносно тРНК еукаріотів виявилася вкрай низькою.
Keywords: проліл-тРНК синтетаза з Thermus thermophilus, ген proS, клонування, секвенування, експресія