Biopolym. Cell. 2009; 25(6):445-450.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.0007F6
Структура та функції біополімерів
Клонування, eкспресія та очищення тРНКPro з бактерії Enterococcus faecalis
1Бояршин К. С., 1Крикливий І. А., 1Яремчук Г. Д., 1Тукало М. А.
  1. Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
    Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680

Abstract

Мета. Розробити методику експресії і очищення транскрипта тРНКPro бактерії E. faecalis. Методи. Коекспресовану in vitro з цис-гідролітичним рибозимом тРНК очищували за допомогою високоефективної рідинної хроматографії з використанням аніонообмінної колонки. Результати. Отримано задовільні вихід продукту та чистоту препаратів. Транскрипт тРНКPro виявляє акцепторну активність у реакції аміноацилювання. Висновки. Розроблений метод може бути впроваджений у лабораторну практику та стати основою для створення нових способів отримання транскриптів інших тРНК.
Keywords: тРНК, транскрипт, експресія генів in vitro, високоефективна рідинна хроматографія
Повний текст: (PDF, російською) (PDF, англійською)

References

[1] Meinnel T., Mechulam Y., Fayat G. Fast purification of a functional elongator tRNAMet expressed from a synthetic gene in vivo Nucl. Acids Res 1988 16, N 16:8095–8096.
[2] Sherlin L. D., Bullock T. L., Nissan T. A., Perona J. J., Lariviere F. J., Uhlenbeck O. C., Scaringe S. A. Chemical and enzymatic synthesis of tRNAs for high-throughput crystallization RNA 2001 7, N 11:1671–1678.
[3] Milligan J. F., Groebe D. R., Witherell G. W., Uhlenbeck O. C. Oligoribonucleotide synthesis using T7 RNA-polymerase and synthetic DNA templates Nucl. Acids Res 1987 15, N 21:8783–8798.
[4] Crepin T., Yaremchuk A., Tukalo M., Cusack S. Structures of two bacterial prolyl-tRNA synthetases with and without a cisediting domain Structure 2006 14, N 10:1511–1525.
[5] An S., Musier-Forsyth K. Cys-tRNA(Pro) editing by Haemophilus influenzae YbaK via a novel synthetase. YbaK.tRNA ternary complex J. Biol. Chem 2005 280, N 41 P. 34465–34472.
[6] Boyarshin E. S., Kriklivyi I. A., Oukali I. A. tRNA-dependent editing of errors by prolyl-tRNA synthetase from bacteria Enterococcus faecalis. Ukr. Biokhim. Zh. 2008; 79(6):40–44.
[7] Boyarshin K. S., Kriklivyi I. A., Rayevsky A. V., Himin A. A., Yaremchuk A. D., Tukalo I. A. Putative active site of Enterococcus faecalis prolyl-tRNA synthetase Biopolym. Cell 2009 25, N 1:39–43.
[8] Taira K., Nakagawa K., Nishikawa S., Furukawa K. Construction of a novel RNA-transcript-trimming plasmid which can be used both in vitro in place of run-off and (G)-free transcriptions and in vivo as multi-sequences transcription vectors Nucl. Acids Res 1991 19, N 19:5125–5130.
[9] Price S. R., Ito N., Oubridge C., Avis J. M., Nagai K. Crystallization of RNA. rotein complexes I. Methods for the largescale preparation of RNA suitable for crystallographic studies J. Mol. Biol 1995 249, N 2:398–408.
[10] Kim I., McKenna S. A., Puglisi E. V., Puglisi J. D. Rapid purification of RNAs using fast performance liquid chromatography (FPLC) RNA 2007 13, N 2:289–294.
[11] Shields T. S., Mollova E., Marie L. S., Hansen M. R., Pardi A. High-performance liquid chromatography purification pf homogenous-length RNA produced by trans cleavage with a hammerhead ribozyme RNA 1999 5, N 9:1259– 1267.
[12] Sood S., Malhotra M., Das B. K., Kapil A. Enterococcal infections & antimicrobial resistance Indian J. Med. Res 2008 128, N 2:111–121.
[13] Arias C. A., Murray B. E. Emergence and management of drug-resistant enterococcal infections Expert Rev Anti Infect Ther. 2008 6, N 5:637–655.
[14] Birnboim H. C., Doly J. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA Nucl. Acids Res 1979 7, N 6:1513–1523.
[15] Liu H., Peterson R., Kessler J., Musier-Forsyth K. Molecular recognition of tRNAPro by Escherichia coli proline tRNA synthetase in vitro Nucl. Acids Res 1995 23, N 1 P. 165–169.