Biopolym. Cell. 2003; 19(4):355-361.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.000667
Структура та функції біополімерів
Комплекс α2 -макроглобулін–трипсин як чутливий елемент потенціометричного біосенсора для опосередкованого кількісного визначення протеїназ
1Білоіван О. А., 1Солдаткін О. П.
  1. Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
    Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680

Abstract

Вивчено можливість використання комплексу α2-макроглобулін (α2М)–трипсин як чутливого елемента потенціометричного біосенсора для опосередкованого кількісного визначення протеїназ за їхньою естеразною активністю при гідролізі Na-бензоїл-Д-аргінін етилового ефіру (ВАЕЕ). Оптимізовано умови іммобілізації комплексу α2М–трипсин на поверхню рН-чутливого польового транзистора в насичених парах глутарового альдегіду. Вивчено властивості розробленої мембрани. Знайдено оптимальні умови вимірювання гідролизу ВАЕЕ за допомогою одержаного на її основі датчика. Показано принципову можливість визначенння концентрації ВАЕЕ в межах 0,1–1,0 мМ і трипсину –0,1–30 ед. акт/мл. Зробле­но висновок щодо перспективності використання розробленої мембрани як чутливого елемента потенціометричного біосенсора.
Повний текст: (PDF, російською)

References

[1] Fu H, Anzai J, Osa T, Matsuo T. Proteolytic enzyme sensors using an ion-sensitive field effect transistor. Chem Pharm Bull (Tokyo). 1988;36(3):1190-3.
[2] Beloivan OA, Soldatkin AP, Starodub NF, El'skaya AV. A proteolytic biosensor based on a pH-sensititive field effect transistor. II. Investigation of operation in model solutions. Biopolym Cell. 1996; 12(4):25-30.
[3] Veremeenko KI, Goloborod’ko OL, Kizim FI. Proteolysis in norm and pathology. Kiev: Zdorov’e, 1998. 199 p.
[4] Roberts RC. Protease inhibitors of human plasma. Alpha-2-macroglobulin. J Med. 1985;16(1-3):129-224.
[5] Veremeenko KI, Kizim OI, Dosenko VE. ? 2 macroglobulin: structure, physiological role and clinical significance. Lab Diagnostics. 2000;2: 3-8.
[6] Mirza M, Saleemuddin M. Entrapment of nonproteolytic enzymes in alpha 2-macroglobulin using immobilized trypsin. Anal Biochem. 1993;213(1):133-9.
[7] Osada T, Kuroda Y, Ikai A. Endocytotic internalization of alpha-2-macroglobulin: alpha-galactosidase conjugate by cultured fibroblasts derived from Fabry hemizygote. Biochem Biophys Res Commun. 1987;142(1):100-6.
[8] Beloivan OA, Soldatkin AP, Starodub NF, El'skaya AV. A proteolytic biosensor based on a pH-sensitive field effect transistor. 1. The comparative investigation of native and immobilized trypsin. Biopolym Cell. 1996; 12(3):27-33.
[9] Shul’ga AA, Strikha VI, Soldatkin AP, El’skaya AV, Maupas H, Martelet C, et al. Removing the influence of buffer concentration on the response of enzyme field effect transistors by using additional membranes. Anal Chim Acta. 1993;278(2):233–6.
[10] Schwert GW, Takenaka Y. A spectrophotometric determination of trypsin and chymotrypsin. Biochim Biophys Acta. 1955;16(4):570-5.
[11] Bradford MM. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 1976;72:248-54.
[12] Antonov VK. Chemistry of proteolysis. M.: Nauka, 1991. 504 p.