Biopolym. Cell. 1991; 7(3):13-20.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.0002C8
RecA-подібні білки у ядрах клітин вищих: виявлення корових структур пахітенних хромосом в ізольованих нефіксованих бичачих мейотичних ядрах за допомогою антитіл до білка RecA з Escherichia coli
1Енгельгардт П., 2Ахмедов А. Т., 2Ланцов В. О.
  1. Відділ вірусології, Гельсінський університет
    Хельсінкі, Фінляндія
  2. Ленінградський інститут ядерної фізики ім. Б. П. Константинова АН СРСР
    Гатчина, Ленінградська обл., СРСР

Abstract

Полівалентні антитіла до білка RecA із E coli (анти-RecA) специфічно взаємодіють з поліпептидами, що мають молекулярну масу 40 000 і 90 000, із пахітенних ядер клітин сім'янників бика. Як показано методом непрямої імунофлюоресценції, анти-RecA на нефіксованих препаратах цих ядер виявляють рівномірно зафарбовані корові структури мейотичних хромосом із яскраво зафарбованими вузлами (іноді тіломірної локалізації) в оточенні ДНК, що пофарбована йодистим пропідієм. Ця картина передбачає зв'язування анти-RecA з компонентами сінаптонемального комплексу, яке чітко виражене в пізніх рекомбінаційних вузлах при утворенні хіазм. У передмейотичних клітинах aнти-RесА фарбують ядро слабше і дифузно, а в сперматозоїдах антиген виявляється, як правило, в спинній та акросомальній частині голівки. Попередня обробка препаратів ядер тритоном Х-100 і 2 M NaCl трохи знижує інтенсивність свічення, але зберігає корові структури, тоді як обробка ДНКазою І з подальшою екстракцією 2 M NaCl викликає помітну дисоціацію антигену.
Повний текст: (PDF, російською)

References

[1] Cox MM, Lehman IR. Enzymes of general recombination. Annu Rev Biochem. 1987;56:229-62.
[2] Kenne K, Ljungquist S. A DNA-recombinogenic activity in human cells. Nucleic Acids Res. 1984;12(7):3057-68.
[3] Hotta Y, Tabata S, Bouchard RA, Piñon R, Stern H. General recombination mechanisms in extracts of meiotic cells. Chromosoma. 1985;93(2):140-51.
[4] Cassuto E, Lightfoot LA, Howard-Flanders P. Partial purification of an activity from human cells that promotes homologous pairing and the formation of heteroduplex DNA in the presence of ATP. Mol Gen Genet. 1987;208(1-2):10-4.
[5] Ganea D, Moore P, Chekuri L, Kucherlapati R. Characterization of an ATP-dependent DNA strand transferase from human cells. Mol Cell Biol. 1987;7(9):3124-30.
[6] Hsieh P, Meyn MS, Camerini-Otero RD. Partial purification and characterization of a recombinase from human cells. Cell. 1986;44(6):885-94.
[7] Lopez B, Rousset S, Coppey J. Homologous recombination intermediates between two duplex DNA catalysed by human cell extracts. Nucleic Acids Res. 1987;15(14):5643-55.
[8] Moore SP, Rich A, Fishel R. The human recombination strand exchange process. Genome. 1989;31(1):45-52.
[9] Akhmedov AT, Namsaraev EA, Zaitseva EM, Zaiisev EN, Lantsov VA. Study of recombination activity in mammalian cell extracts. Biopolym Cell. 1990; 6(2):38-45.
[10] Higashitani A, Tabata S, Ogawa T, Ogawa H, Shibata M, Hotta Y. ATP-independent strand transfer protein from murine spermatocytes, spermatids, and spermatozoa. Exp Cell Res. 1990;186(2):317-23.
[11] Giroux CN. Chromosome synapsis and meiotic recombination. Genetic recombination. Eds R. Kucherlapati, G. Smith. Washington: Amer. Soc. Microbiol., 1988: 465-96.
[12] Angulo JF, Moreau PL, Maunoury R, Laporte J, Hill AM, Bertolotti R, Devoret R. KIN, a mammalian nuclear protein immunologically related to E. coli RecA protein. Mutat Res. 1989;217(2):123-34.
[13] Hotta Y, Stern H. Meiotic protein in spermatocytes of mammals. Nat New Biol. 1971;234(46):83-6.
[14] Cox MM, McEntee K, Lehman IR. A simple and rapid procedure for the large scale purification of the recA protein of Escherichia coli. J Biol Chem. 1981;256(9):4676-8.
[15] Jaton JC, Brandt DCh., Vassalli P. The isolation and character- ization of immunoglobulins, antibodies, and their constituent polypeptide chains, in Immunological Methods, vol. 1 (Lefkovits, I. and Pernis, B., eds.), Academic, New York, 1979:43-67.
[16] Zaĭtsev EN, Zaĭtseva EM, Bakhlanova IV, Gorelov VN, Kuz'min NP. Cloning and characteristics of recA gene in Pseudomonas aeruginosa. Genetika. 1986;22(11):2721-7.
[17] Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970;227(5259):680-5.
[18] Engelhardt P, Plagens U, Zbarsky IB, Filatova LS. Granules 25-30 nm in diameter: basic constituent of the nuclear matrix, chromosome scaffold, and nuclear envelope. Proc Natl Acad Sci U S A. 1982;79(22):6937-40.
[19] Thelander L, Berg P. Isolation and characterization of expressible cDNA clones encoding the M1 and M2 subunits of mouse ribonucleotide reductase. Mol Cell Biol. 1986;6(10):3433-42.
[20] Angulo JF, Schwencke J, Moreau PL, Moustacchi E, Devoret R. A yeast protein analogous to Escherichia coli RecA protein whose cellular level is enhanced after UV irradiation. Mol Gen Genet. 1985;201(1):20-4.
[21] Elledge SJ, Davis RW. Identification and isolation of the gene encoding the small subunit of ribonucleotide reductase from Saccharomyces cerevisiae: DNA damage-inducible gene required for mitotic viability. Mol Cell Biol. 1987;7(8):2783-93.
[22] Engström Y, Rozell B, Hansson HA, Stemme S, Thelander L. Localization of ribonucleotide reductase in mammalian cells. EMBO J. 1984;3(4):863-7. PubMed
[23] Heyting C, Moens PB, van Raamsdonk W, Dietrich AJ, Vink AC, Redeker EJ. Identification of two major components of the lateral elements of synaptonemal complexes of the rat. Eur J Cell Biol. 1987;43(1):148-54.
[24] Heyting C, Dettmers RJ, Dietrich AJ, Redeker EJ, Vink AC. Two major components of synaptonemal complexes are specific for meiotic prophase nuclei. Chromosoma. 1988;96(4):325-32.
[25] Moens PB, Heyting C, Dietrich AJ, van Raamsdonk W, Chen Q. Synaptonemal complex antigen location and conservation. J Cell Biol. 1987;105(1):93-103.
[26] Moens PB, Earnshaw WC. Anti-topoisomerase II recognizes meiotic chromosome cores. Chromosoma. 1989;98(5):317-22.