Biopolym. Cell. 1990; 6(3):50-55.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.00026B
Структура та функції біополімерів
Препаративне отримання рібоолігонуклеотідов заданого будови шляхом транскрипції дезоксирибоолигонуклеотидов
1Денисова Л. Я., 2Загребельний С. Н., 1Пустошилова Н. М., 1Веньямінова А. Г., 2Горн В. В., 2Заритова В. Ф., 2Репкова М. Н.
  1. НДКТІ Біологічно Активних Речовин
    Бердск, Новосибірська область, СРСР
  2. Інститут біоорганічної хімії Сибірського відділення АН СРСР
    Новосибірськ, СРСР

Abstract

Транскрипція дезоксирибоолігонуклеотидних матриць у системі РНК-полімерази Escherichia coli є одним із перспективних методів отримання рибоолігонуклеотидів заданої будови. Для одержання препаративних кількостей AGGGGAUUGAAAAUC-фрагмента антикодонової петлі фенілаланінової тРНК і AUGAGGAAUACCCAUG-фрагмента РНК фага MS2 проведено транскрипцію комплементарних дезоксирибоолігонуклеотидів. Рівень включення нуклеотидів у продукт транскрипції при цьому становив не менше 70 % нуклеотидного матеріалу матриці. Розроблено процедуру вилучення транскрипта з реакційної суміші, що включає хроматографію на гепарин-агарозі, хроматографію на гідрофобному сорбенті Lichroprep RP18 і електрофорез у 20 %-му поліакриламідному гелі з подальшою електроелюцією цільового продукту з гелю. При використанні в РНК-полімеразній реакції 5 о. о. A260 дезоксирибоматриці кінцевий вихід точної РНК-копії склав 1,0–1,5 о. о. A260.
Повний текст: (PDF, російською)

References

[1] Denisova LIa, Zagrebel'nyĭ SN, Pustoshilova NM. Template activity of pyrimidine deoxyribooligonucleotides in the E. coli polymerase system. Mol Biol. 1974;8(5):643-50.
[2] Badashkeeva AG, Denisova LIa, Zagrebel'nyĭ SN, Knorre DG, Pustoshilova NM. Template properties of the decadeoxynucleotide d(pCCACGAAACC) in the RNA polymerase system of Escherichia coli. Mol Biol (Mosk). 1978;12(2):327-33.
[3] Belova NV, Denisova LIa, Zagrebel'nyĭ SN, Pustoshilova NM, Saĭkovich EG. Transcription of synthetic oligonucleotides. Mol Biol (Mosk). 1979;13(4):845-53.
[4] Denisova LIa, Zagrebel'nyĭ SN, Kutiavin IV, Pustoshilova NM. Continuous copying of the short matrices of DNA-dependent RNA-polymerase. Dokl Akad Nauk SSSR. 1982;267(2):475-8.
[5] Gryaznov SM, Gorn VV, Zarytova VF, Kumarev VP, Levina AS, Polishchuk AS, Potapov VK, Potemkin GA, Sredin YuG, Shabarova ZA. Automatic synthesis of oligodeoxyribonucleotides with phosphoramidite method on the "Victoria-4M."Izvestiya Sibirskogo Otdeleniya Akad. Nauk SSSR. Ser. Khim. Nauk. 1987; 2(1):119-23.
[6] Volkov EM, Gryaznov SM, Krynetskaya NF, Oretskaya TS, Potapov VK. Comparative characteristics of the methods of synthesis oligodeoxyribonucleoside-3'-phosphate. Khimiia prirodnykh soedineniy. 1986; (2):228-34.
[7] Ven'iaminova AG, Ovcharenko GV, Repkova MN, Frank LA. Synthesis of leucine codons and their use in the study of tRNALeu codon correspondence. Mol Biol (Mosk). 1984;18(5):1376-9.
[8] Maniatis T, Jeffrey A, van deSande H. Chain length determination of small double- and single-stranded DNA molecules by polyacrylamide gel electrophoresis. Biochemistry. 1975;14(17):3787-94.
[9] Richardson CC. Phosphorylation of nucleic acid by an enzyme from T4 bacteriophage-infected Escherichia coli. Proc Natl Acad Sci U S A. 1965;54(1):158-65.
[10] Donis-Keller H, Maxam AM, Gilbert W. Mapping adenines, guanines, and pyrimidines in RNA. Nucleic Acids Res. 1977;4(8):2527-38.
[11] Nath K, Hurwitz J. Covalent attachment of ribonucleotides at 3'-hydroxyl ends of deoxyribonucleic acid catalyzed by deoxyribonucleic acid-dependent ribonucleic acid polymerase of Escherichia coli. J Biol Chem. 1974;249(8):2605-15.