Biopolym. Cell. 1990; 6(2):38-45.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.000258
Вивчення рекомбинаційної активності в екстрактах клітин ссавців
1Ахмедов А. Т., 1Намсараєв Е. А., 1Зайцева О. М., 1Зайцев Є. Н., 1Ланцов В. А.
  1. Ленінградський інститут ядерної фізики ім. Б. П. Константинова АН СРСР
    Гатчина, Ленінградська обл., СРСР

Abstract

Описано безклітинну систему, у якій використовують екстракти ядер мієлобластів людини, клітин HeLa і сім’яників щурів для ініціації рекомбінації між гомологічними плазмідами, що несуть різні мутантні алелі Тс-гена. Інкубація цих плазмід з ядерними екстрактами збільшує частоту Tсr-рекомбінантів з 2,6 · 10–5 до 2,7· 103. Реакція вимагає іонів Mg2+ і не залежить від присутності ATP і dNTP. Крім того, використавши чутливий метод визначення реакції перенесення нитки, ми частково очистили ATP- незалежну рекомбіназную активність з ядерних екстрактів сім’яників щурів. Реакція вимагає гомології між ДНК-субстратами і присутності іонів Mg2+.
Повний текст: (PDF, російською)

References

[1] Davies KE, Robson KJ. Molecular analysis of human monogenic diseases. Bioessays. 1987;6(6):247-53.
[2] Anderson WF. Prospects for human gene therapy. Science. 1984;226(4673):401-9.
[3] Maniatis T. Targeting in mammalian cells. Nature. 1985 Sep 19-25;317(6034):205-6.
[4] Marx JL. Gene therapy--so near and yet so far away. Science. 1986;232(4752):824-5.
[5] Lantsov VA. Bacterial RecA protein: a biochemical, genetic and physicochemical analysis. Genetika. 1985;21(9):1413-27.
[6] Cox MM, Lehman IR. Enzymes of general recombination. Annu Rev Biochem. 1987;56:229-62.
[7] Kmiec E, Holloman WK. Homologous pairing of DNA molecules promoted by a protein from Ustilago. Cell. 1982;29(2):367-74.
[8] Kenne K, Ljungquist S. A DNA-recombinogenic activity in human cells. Nucleic Acids Res. 1984;12(7):3057-68.
[9] Hotta Y, Tabata S, Bouchard RA, Piñon R, Stern H. General recombination mechanisms in extracts of meiotic cells. Chromosoma. 1985;93(2):140-51.
[10] Hsieh P, Meyn MS, Camerini-Otero RD. Partial purification and characterization of a recombinase from human cells. Cell. 1986;44(6):885-94.
[11] Cassuto E, Lightfoot LA, Howard-Flanders P. Partial purification of an activity from human cells that promotes homologous pairing and the formation of heteroduplex DNA in the presence of ATP. Mol Gen Genet. 1987;208(1-2):10-4.
[12] Ganea D, Moore P, Chekuri L, Kucherlapati R. Characterization of an ATP-dependent DNA strand transferase from human cells. Mol Cell Biol. 1987;7(9):3124-30.
[13] Kolodner R, Evans DH, Morrison PT. Purification and characterization of an activity from Saccharomyces cerevisiae that catalyzes homologous pairing and strand exchange. Proc Natl Acad Sci U S A. 1987;84(16):5560-4.
[14] Lopez B, Rousset S, Coppey J. Homologous recombination intermediates between two duplex DNA catalysed by human cell extracts. Nucleic Acids Res. 1987;15(14):5643-55.
[15] Eisen A, Camerini-Otero RD. A recombinase from Drosophila melanogaster embryos. Proc Natl Acad Sci U S A. 1988;85(20):7481-5.
[16] Fishel RA, Detmer K, Rich A. Identification of homologous pairing and strand-exchange activity from a human tumor cell line based on Z-DNA affinity chromatography. Proc Natl Acad Sci U S A. 1988;85(1):36-40.
[17] McCarthy JG, Sander M, Lowenhaupt K, Rich A. Sensitive homologous recombination strand-transfer assay: partial purification of a Drosophila melanogaster enzyme and detection of sequence effects on the strand-transfer activity of RecA protein. Proc Natl Acad Sci U S A. 1988;85(16):5854-8.
[18] Sugino A, Nitiss J, Resnick MA. ATP-independent DNA strand transfer catalyzed by protein(s) from meiotic cells of the yeast Saccharomyces cerevisiae. Proc Natl Acad Sci U S A. 1988;85(11):3683-7.
[19] Maniatis T., Fritsch E. F., Sambrook J. Molecular cloning: a laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor Lab. press, 1982 545 p.
[20] DNA Cloning. First edition. Ed. D. Glover. Oxford, IRL Press, 1985; 245 p.
[21] Kalb VF Jr, Bernlohr RW. A new spectrophotometric assay for protein in cell extracts. Anal Biochem. 1977;82(2):362-71.
[22] Symington LS, Fogarty LM, Kolodner R. Genetic recombination of homologous plasmids catalyzed by cell-free extracts of Saccharomyces cerevisiae. Cell. 1983;35(3 Pt 2):805-13.
[23] Darby V, Blattner F. Homologous recombination catalyzed by mammalian cell extracts in vitro. Science. 1984;226(4679):1213-5.
[24] Kucherlapati RS, Spencer J, Moore PD. Homologous recombination catalyzed by human cell extracts. Mol Cell Biol. 1985;5(4):714-20.