Biopolym. Cell. 1990; 6(2):35-38.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.000257
Підбір оптимальних умов проведення ланцюгової реакції синтезу ДНК при ідентифікації мутацій в 12-м екзоні гена фенілаланінгідроксилази людини
1Ніколенко М. І., 1Арбузова С. Б.
  1. Донецький медичний інститут ім. М. Горького, медико-генетичний центр
    Донецьк, СРСР

Abstract

Описано умови проведення реакції ампліфікації ДНК для визначення мутацій у 12-му екзоні гена фенілаланінгідроксилази (ФАГід). Вказано на необхідність оптимізації умов реакції. Підкреслюється важливість послідовності складання реакційній суміші, при цьому праймери, фермент і трифосфати слід додавати після денатурації ДНК. ДНК можна виділяти не тільки з цільної крові хворих на фенілкетонурію (ФКУ), а й із сухих плям крові на фільтрувальному папері. В результаті ампліфікації утворюється фрагмент гена ФАГід довжиною 245 пар основ, що несе мутації. Подальша дот-гібридизація з мутантними міченими зондами дозволяє визначити гетерозиготне носійство у здорових членів сімей.
Повний текст: (PDF, російською)

References

[1] Saiki RK, Scharf S, Faloona F, Mullis KB, Horn GT, Erlich HA, Arnheim N. Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia. Science. 1985;230(4732):1350-4.
[2] Williams C, Williamson R, Coutelle C, Loeffler F, Smith J, Ivinson A. Same-day, first-trimester antenatal diagnosis for cystic fibrosis by gene amplification. Lancet. 1988;2(8602):102-3.
[3] Davies KE, Robson KJ. Molecular analysis of human monogenic diseases. Bioessays. 1987;6(6):247-53.
[4] DiLella AG, Kwok SC, Ledley FD, Marvit J, Woo SL. Molecular structure and polymorphic map of the human phenylalanine hydroxylase gene. Biochemistry. 1986;25(4):743-9.
[5] Woo SL. Molecular basis and population genetics of phenylketonuria. Biochemistry. 1989;28(1):1-7.
[6] Davies KE. Human genetic disease, a practical approach. Oxford: Inform. Printing Ltd., 1986; 223 p.
[7] Shvarts EI, Kaboev OK, Gol'tsov AA, Vinogradov SV, Lebedenko EN. Primer-dependent amplification of 2 sites of human beta-globin gene. Bioorg Khim. 1988;14(11):1577-9.
[8] Maniatis T., Fritsch E. F., Sambrook J. Molecular cloning: a laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor Lab. press, 1982 545 p.
[9] McCabe ER, Huang SZ, Seltzer WK, Law ML. DNA microextraction from dried blood spots on filter paper blotters: potential applications to newborn screening. Hum Genet. 1987;75(3):213-6.