Biopolym. Cell. 2021; 37(6):447-458.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.000A6A
Молекулярна та клітинна біотехнології
Бензоксазольний стирилціаніновий барвник як флуоресцентний зонд для візуалізації функціональних амілоїдів у біоплівці Staphylococcus aureus ATCC25923
1Черній С. В., 1Мошинець О. В., 1Арістова Д. І., 1Криворотенко Д. В., 1Лосицький М. Ю., 1, 2Юнгін О. С., 1Ярмолюк С. М., 1Волинець Г. П.
  1. Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
    Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03143
  2. Київський національний університет технологій та дизайну
    вул. Немировича-Данченка, 2, Київ, Україна, 01011

Abstract

Мета. Синтез та характеристика стирилціанінового барвника як потенційного флуоресцентного зонда для виявлення патологічних амілоїдних фібрил in vitro та виявлення функціонального амілоїду в біоплівці S. aureus. Методи. Хімічний синтез, флуоресцентна спектроскопія, вивчення фотостабільності опроміненням джерелом видимого світла, конфокальна мікроскопія, флуоресцентна мікроскопія. Результати. Стирилціаніновий барвник у вільному стані має низьку флуоресценцію, але в присутності амілоїдних фібрил in vitro показує збільшення інтенсивності емісії до 214 разів залежно від структури амілоїдогенного білка, найбільш виражене підвищення спостерігалося для фібрил бета-лактоглобуліну. Фотостабільність барвника у вільному стані низька, але зв’язування з амілоїдними фібрилами призводить до сильного збільшення фотостійкості барвника. Після фарбування біоплівки S. aureus барвник забарвлює позаклітинні компоненти матриксу біоплівки і не проникає у клітину. Висновки. Цей барвник запропоновано для візуалізації функціональних амілоїдів біоплівки S. aureus у червоному спектрі.
Keywords: флуоресцентна мікроскопія, стирилові барвники, S.aureus, функціональні амілоїди, бактеріальна біоплівка, конфокальна лазерна скануюча мікроскопія
Повний текст: (PDF, англійською)

References

[1] Koza A, Kusmierska A, McLauglin K, Moshynets O, Spiers AJ. Adaptive radiation of P. fluorescens SBW25 in experimental microcosms provides an understanding of the evolutionary ecology and molecular biology of A-L interface biofilm-formation. FEMS Microbiol Lett. 2017;364(12).
[2] Moshynets OV, Spiers AJ. Viewing biofilms within the larger context of bacterial aggregations. In "Biofilms". InTech Press, 2016; 3-22.
[3] Robertson M, Hapca SM, Moshynets O, Spiers AJ. Air-liquid interface biofilm formation by psychrotrophic pseudomonads recovered from spoilt meat. Antonie Van Leeuwenhoek. 2013; 103(1):251-9.
[4] De Rycker M, Horn D, Aldridge B, Amewu RK, Barry CE, Buckner FS, Cook S, Ferguson MA, Gobeau N, Herrmann J, Herrling P, Hope W, Keiser J, Lafuente MJ, Leeson PD, Leroy D, Manjunatha UH, McCarthy J, Mizrahi V, Moshynets O, Niles J, Overington JP, Pottage J, Rao SP, Read KD, Ribeiro I, Silver LL, Southern J, Spangenberg T, Sundar S, Taylor C, Voorhis WV, White NJ, Wyllie S, Wyatt PG, Gilbert IH. Setting our sights on infectious diseases. ACS Infectious Disease. 2020; 6(1):3-13
[5] Moshynets O, Bardeau JF, Tarasyuk O, Makhno S, Cherniavska T, Dzhuzha O, Potters G, Rogalsky S. Antibiofilm activity of polyamide 11 modified with thermally stable polymeric biocide polyhexamethylene gua-nidine 2-naphtalenesulfonate.Int J Mol. Sci. 2019; 20(2):348.
[6] Flemming H-C, Wingender J, Szewzyk U, Steinberg P, Rice SA, Kjelleberg S. Biofilms: an emergent form of bacterial life. Nat Rev Microbiol. 2016;14(9): 563-75.
[7] Matz C, Kjelleberg S. Off the hook-how bacteria survive protozoan grazing. Trends Microbiol. 2005;13(7):302-7.
[8] Lee KWK, Periasamy S, Mukherjee M, Xie C, Kjelleberg S, Rice SA. Biofilm development and enhanced stress resistance of a model, mixed-species community biofilm. ISME J. 2014;8(4):894-907.
[9] Burmølle M, Ren D, Bjarnsholt T, Sørensen SJ. Interactions in multiespecies biofilms: do they actually matter? Trends Microbiol. 2014; 22(2):84-91.
[10] Young KD. The selective value of bacterial shape. Microbiol Mol Biol Rev. 2006;70(3):660-703.
[11] Martin M, Hölscher T, Dragos A, Cooper VS, Kovács AT. Laboratory evolution of microbial interactions in bacterial biofilms. J Bacteriol. 2016; 198(19):2564-71.
[12] Moshynets OV, Foster D, Karakhim SA, McLaughlin K, Rogalsky SP, Rymar SY, Volynets GP, Spiers AJ. Examining c-di-GMP and possible QS regulation in Pseudomonas fluorescens SBW25: links between intra and inter-cellular regulation benefits community cooperative activities such as biofilm formation. Ukr Biochem J. 2018; 90 (3): 17-31.
[13] Hobley L, Harkins C, MacPhee CE, Stanley-Wall NR. Giving structure to the biofilm matrix: an overview of individual strategies and emerging common themes. FEMS Microbiol Rev. 2015; 39(5):649-69.
[14] Turnbull L, Toyofuku M, Hynen AL, Kurosawa M, Pessi G, Petty NK, Osvath SR, Cárcamo-Oyarce G, Gloag ES, Shimoni R, Omasits U, Ito S, Yap X, Monahan LG, Cavaliere R, Ahrens CH, Charles IG, Nomura N, Eberl L, Whitchurch CB. Explosive cell lysis as a mechanism for the biogenesis of bacterial membrane vesicles and biofilms. Nat Commun. 2016; 7:11220
[15] McLaughlin K, Folorunso AO, Deeni YY, Foster D, Gorbatiuk O, Hapca SM, Immoor C, Koza A, Mohammed IU, Moshynets O, Rogalsky S, Zawadzki K, Spiers AJ. Biofilm formation and cellulose expression by Bordetella avium 197N, the causative agent of bordetellosis in birds and an opportunistic respiratory pathogen in humans. Res Microbiol. 2017; 168(5): 419-30.
[16] Dueholm MS, Otzen D, Nielsen PH. Evolutionary insight into the functional amyloids of the pseudomonads. PLoS One. 2013;8(10):e76630.
[17] Serra D, Richter A, Klauck G, Mika F, Hengge R. Cellulose as an architectural element in spatially structured Escherichia coli biofilms. J Bacteriol. 2013; 4(2):e00103-13.
[18] Archer GL. Staphylococcus aureus: a well-armed pathogen. Clin Infect Dis. 1998;26(5):1179-81.
[19] Pérez-Montarelo D, Viedma E, Murcia M, Muñoz-Gallego I, Larrosa N, Brañas P, Fernández-Hidalgo N, Gavaldà J, Almirante B, Chaves F. Pathogenic characteristics of Staphylococcus aureus endovascular infection isolates from different clonal complexes. Front Microbiol. 2017;8:917.
[20] Cucarella C, Solano C, Valle J, Amorena B, Lasa I, Penadés JR. Bap, a Staphylococcus aureus surface protein involved in biofilm formation. J Bacteriol. 2001;183(9):2888-96.
[21] Van Gerven N, Van der Verren SE, Reiter DM, Remaut H. The role of functional amyloids in bacterial virulence. J Mol Biol. 2018;430(20):3657-84.
[22] Volynets G, Vyshniakova H, Nitulescu G, Nitulescu GM, Ungurianu A, Margina D, Moshynets O, Bdzhola V, Koleiev I, Iungin O, Tarnavskiy S, Yarmoluk S. Identification of novel antistaphylococcal hit compounds targeting Sortase A. Molecules. 2021;26(23):7095.
[23] Kim JY, Sahu S, Yau YH, Wang X, Shochat SG, Nielsen PH, Dueholm MS, Otzen DE, Lee J, Delos Santos MM, Yam JK, Kang NY, Park SJ, Kwon H, Seviour T, Yang L, Givskov M, Chang YT. Detection of pathogenic biofilms with bacterial amyloid targeting fluorescent probe, CDy11. J Am Chem Soc. 2016;138(1):402-7.
[24] Otzen D. Functional amyloid: turning swords into plowshares. Prion. 2010;4(4):256-64.
[25] Oli MW, Otoo HN, Crowley PJ, Heim KP, Nascimento MM, Ramsook CB, Lipke PN, Brady LJ. Functional amyloid formation by Streptococcus mutans. Microbiology. 2012;158(Pt 12):2903-16.
[26] Shewmaker F, McGlinchey RP, Wickner RB. Structural insights into functional and pathological amyloid. J Biol Chem. 2011;286(19):16533-40.
[27] Sugimoto S, Arita-Morioka K, Mizunoe Y, Yamanaka K, Ogura T. Thioflavin T as a fluorescence probe for monitoring RNA metabolism at molecular and cellular levels. Nucleic Acids Res. 2015;43(14):e92.
[28] Kovalska V, Chernii S, Losytskyy M, Dovbii Y, Tretyakova I, Czerwieniec R, Chernii V, Yarmoluk S, Volkov S. β-ketoenole dyes: synthesis and study as fluorescent sensors for protein amyloid aggregates. Dyes Pigments. 2016;132:274-81.
[29] Kovalska V, Chernii S, Losytskyy M, Tretyakova I, Dovbii Y, Gorski A, Chernii V, Czerwieniec R, Yarmoluk S. Design of functionalized β-ketoenole derivatives as efficient fluorescent dyes for detection of amyloid fibrils. New J Chem. 2018; 42(16):13308-18.
[30] Moshynets O, Chernii S, Chernii V, Losytskyy M, Karakhim S, Czerwieniec R, Pekhnyo V, Yarmoluk S, Kovalska V. Fluorescent β-ketoenole AmyGreen dye for visualization of amyloid components of bacterial biofilms. Methods Appl Fluoresc. 2020;8(3):035006.
[31] Mazaheri M, Moosavi-Movahedi AA, Saboury AA, Khodagholi F, Shaerzadeh F, Sheibani N. Curcumin protects β-Lactoglobulin fibril formation and fibril-induced neurotoxicity in PC12 Cells. PLoS One. 2015;10(7):e0133206.
[32] Kovalska V, Chernii S, Cherepanov V, Losytskyy M, Chernii V, Varzatskii O, Naumovets A, YarmolukS. The impact of binding of macrocyclic metal complexes on amyloid fibrillization of insulin and lysozyme. J Mol Recognit. 2017; 30(8):e2622.
[33] Sambrook J, Fritsch E, Maniatis T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd ed.). Cold Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press. 1989.
[34] Schindelin J, Arganda-Carreras I, Frise E, Kaynig V, Longair M, Pietzsch T, Preibisch S, Rueden C, Saalfeld S, Schmid B, Tinevez JY, White DJ, Hartenstein V, Eliceiri K, Tomancak P, Cardona A. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nat Methods. 2012;9(7):676-82.