Biopolym. Cell. 2021; 37(1):14-22.
Молекулярна та клітинна біотехнології
Вплив кріоконсервування з полівініловим спиртом на збереженість і функціональну активність інтерстиціальних клітин сім’яників щурів
1, 2, 3Пахомов О. В., 1, 4Сидоренко О. С.
  1. Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
    23, Переяслівська вул., Харків, Україна, 61015
  2. Харківський національний університет ім. В. Н. Каразина
    пл. Свободи, 4, Харків, Україна, 61022
  3. Харківський національний медичний університет
    Пр. Науки, 4, Харків, Україна, 61022
  4. Інститут сцинтиляційних материалів НАН України
    Пр. Леніна, 60, Харків, Україна, 61001
Мета. Вивчити вплив полівінілового спирту (ПВС) в кріозахисному середовищі на виживання і проліферацію інтерстиціальних клітин (ІК) сім’яників щурів після кріоконсервування. Методи. ІК отримували з сім’яників щурів ферментативним методом з використанням колагенази (тип I) і ДНКази I. Отримані клітини кріоконсервували за трьома методами. У методах 1 і 2 використовувалося кріозахисне середовище (КС) на основі 1,4 M диметилсульфоксиду (ДМСО) і 10 % фетальної телячої сироватки (ФТС), при цьому застосовувалися різні швидкості охолодження до -70 °C. Метод 1: ІК охолоджували зі швидкістю 1 °C/хв. Метод 2: після початку кристалізації клітини охолоджували зі швидкістю 15 °C/хв до –40 °C і зі швидкістю 20 °C/хв від –40 до –70 °C. Метод 3 передбачав швидкість охолодження 1 °C/хв, але ФТС була замінена на 20 мг/мл ПВС. При досягненні температури –70 °C зразки занурювали в рідкий азот (–196 °C). Після нагрівання і видалення кріозахисного середовища ІК культивували в середовищі Ham’s/F12 з хоріонічним гонадотропіном людини (ХГЛ) і без нього. Результати. Використання методу 2 дозволило підвищити виживаність клітин Лейдіга в зразках до 79,5 (70,0; 90,0)% в порівнянні з методом 1 (42,0 (37,0; 47,0)%). Використання ПВС в методі 3 не вплинуло на виживання ІК і клітин Лейдіга в порівнянні з методом 1. Культивування клітин показало, що кількість клітин Лейдіга в лунках збільшилася до 17 (0,09; 0,39) і 0,12 (0,08; 0,14) × 106 після кріоконсервування за способами 2 і 3 відповідно, коли клітини стимулювали ХГЛ. Ці значення в кілька разів перевищують вихідну кількість клітин в лунках (0,65 (0,57; 0,71) × 104). Висновок. ПВС в поєднанні з іншими компонентами кріозахисного середовища сприяв збереженню клітин Лейдіга, здатних до подальшої проліферації в культурі, особливо в присутності ХГЛ.
Keywords: інтерстиціальні клітини сім’яників, клітини Лейдіга, кріоконсервування, полівініловий спирт, проліферація клітин, хоріонічний гонадотропін людини