Biopolym. Cell. 2020; 36(2):99-109.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.000A24
Структура та функції біополімерів
Біологічні властивості клітин лінії HEK293T, трансфікованої mCD150 та nCD150 ізоформами рецептора CD150/SLAMF1
1Шлапацька Л. М., 1Гордієнко І. М., 1Ковалевська Л. М., 1Сидоренко С. П.
  1. Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р. Є. Кавецького
    вул. Васильківська, 45, Київ, Україна, 03022

Abstract

Мета. З’ясувати роль mCD150 та nCD150 ізоформ рецептора CD150/SLAMF1 у регуляції проліферативної активності та колонієутворювальної здатності клітин лінії HEK293T. Методи. В роботі були використані методи культури клітин, трансфекції, кількісної ПЛР, проточної цитометрії, аналізу проліферації клітин, клітинного циклу, формування колоній та статистичні методи. Результати. В результаті трансфекції клітин лінії HEK293T послідовностями кДНК mCD150 та nCD150 ізоформ CD150 було отримано дві сублінії зі стабільною диференційною та виключно цитоплазматичною експресією цих ізоформ – HEK293T-pBABE-mCD150 та HEK293T-pBABE-nCD150. Клітини HEK293T, трансфіковані mCD150 та nCD150 ізоформами, характеризуються більш високою проліферативною активністю та рівнем експресії ядерного антигена проліферуючих клітин IPO38 порівняно з клітинами HEK293T та HEK293T-pBABE-puro. Аналіз розподілу клітин за фазами клітинного циклу виявив, що достовірно вищий відсоток клітин HEK293T-pBABE-mCD150 та HEK293T-pBABE-nCD150 перебуває у S і менший у G0/G1 фазі проти такого в клітинах HEK293T і HEK293T-pBABE-puro. Крім того, достовірно вищий відсоток клітин HEK293T, трансфікованих кДНК nCD150, але не mCD150 ізоформою, встановлено і у G2/M фазі клітинного циклу порівняно із клітинами контрольних субліній. З’ясовано, що за низької щільності посіву як клітини HEK293T-pBABE-mCD150, так і HEK293T-pBABE-nCD150 здатні формувати колонії, чого не спостерігається у клітинах HEK293T та HEK293-pBABE-puro. Висновок. mCD150 та nCD150 ізоформи мають властивості, що сприяють посиленню проліферативного та клоногенного потенціалу клітин з більш вираженим ефектом ізоформи nCD150.
Keywords: рецептор CD150/SLAMF1, mCD150 ізоформа, nCD150 ізоформа, лінія клітин HEK293T, проліферація, колонієутворення
Повний текст: (PDF, англійською)

References

[1] Bruikman CS, Zhang H, Kemper AM, van Gils JM. Netrin Family: Role for Protein Isoforms in Cancer. J Nucleic Acids. 2019;2019:3947123.
[2] Wang BD, Lee NH. Aberrant RNA Splicing in Cancer and Drug Resistance. Cancers (Basel). 2018;10(11). pii: E458.
[3] Fortier AM, Asselin E, Cadrin M. Functional specificity of Akt isoforms in cancer progression. Biomol Concepts. 2011;2(1-2):1-11.
[4] Manning BD, Cantley LC. AKT/PKB signaling: navigating downstream. Cell. 2007;129(7):1261-74.
[5] Roy NK, Bordoloi D, Monisha J, Padmavathi G, Kotoky J, Golla R, Kunnumakkara AB. Specific Targeting of Akt Kinase Isoforms: Taking the Precise Path for Prevention and Treatment of Cancer. Curr Drug Targets. 2017;18(4):421-35.
[6] Gonzalez E, McGraw TE. The Akt kinases: isoform specificity in metabolism and cancer. Cell Cycle. 2009;8(16):2502-8.
[7] Dhanasekaran DN, Reddy EP. JNK-signaling: A multiplexing hub in programmed cell death. Genes Cancer. 2017;8(9-10):682-94.
[8] Roy A, Ye J, Deng F, Wang QJ. Protein kinase D signaling in cancer: A friend or foe? Biochim Biophys Acta. 2017;1868(1):283-94.
[9] Shabelnik MY, Kovalevska LM, Yurchenko MY, Shlapatska LM, Rzepetsky Y, Sidorenko SP. Differential expres-sion of PKD1 and PKD2 in gastric cancer and analysis of PKD1 and PKD2 function in the model system. Exp Oncol. 2011;33(4):206-11.
[10] Kreizman-Shefer H, Pricop J, Goldman S, Elmalah I, Shalev E. Distribution of estrogen and progesterone receptors isoforms in endometrial cancer. Diagn Pathol. 2014;9:77.
[11] Ginsburg E, Alexander S, Lieber S, Tarplin S, Jenkins L, Pang L, Heger CD, Goldsmith P, Vonderhaar BK. Characterization of ductal and lobular breast carcinomas using novel prolactin receptor isoform specific antibodies. BMC Cancer. 2010;10:678.
[12] Maramotti S, Paci M, Miccichè F, Ciarrocchi A, Cavazza A, De Bortoli M, Vaghi E, Formisano D, Canovi L, Sgarbi G, Bongarzone I. Soluble epidermal growth factor receptor isoforms in non-small cell lung cancer tissue and in blood. Lung Cancer. 2012;76(3):332-8.
[13] Machleidt A, Buchholz S, Diermeier-Daucher S, Zeman F, Ortmann O, Brockhoff G. The prognostic value of Her4 receptor isoform expression in triple-negative and Her2 positive breast cancer patients. BMC Cancer. 2013;13:437.
[14] Gordiienko I, Shlapatska L, Kovalevska L, Sidorenko SP. SLAMF1/CD150 in hematologic malignancies: Silent marker or active player? Clin Immunol. 2019;204:14-22.
[15] Gordiienko I, Shlapatska L, Kholodniuk V, Sklyarenko L, Gluzman DF, Clark EA, Sidorenko SP. The interplay of CD150 and CD180 receptor pathways contribute to the pathobiology of chronic lymphocytic leukemia B cells by selective inhibition of Akt and MAPK signaling. PLoS One. 2017;12(10):e0185940.
[16] Gordiienko IM, Shlapatska LM, Kovalevska LM, Sidorenko SP. Differential expression of CD150/SLAMF1 in normal and malignant B cells on the different stages of maturation. Exp Oncol. 2016;38(2):101-7.
[17] Romanets-Korbut O, Najakshin AM, Yurchenko M, Malysheva TA, Kovalevska L, Shlapatska LM, Zozulya YA, Taranin AV, Horvat B, Sidorenko SP. Expression of CD150 in tumors of the central nervous system: identification of a novel isoform. PLoS One. 2015;10(2):e0118302.
[18] Freshney RI. Culture of animal cells: a manual of basic technique and specialized applications. - 6th ed. Wi-ley-Blackwell, 2010; 796 p.
[19] Yurchenko M, Skjesol A, Ryan L, Richard GM, Kandasamy RK, Wang N, Terhorst C, Husebye H, Espevik T. SLAMF1 is required for TLR4-mediated TRAM-TRIF-dependent signaling in human macrophages. J Cell Biol. 2018;217(4):1411-29.
[20] Sidorenko SP, Clark EA. Characterization of a cell surface glycoprotein IPO-3, expressed on activated human B and T lymphocytes. J Immunol. 1993;151(9):4614-24.
[21] Cocks BG, Chang CC, Carballido JM, Yssel H, de Vries JE, Aversa G. A novel receptor involved in T-cell activation. Nature. 1995;376(6537):260-3.
[22] Mikhalap SV, Shlapatska LM, Yurchenko OV, Yurchenko MY, Berdova GG, Nichols KE, Clark EA, Sidorenko SP. The adaptor protein SH2D1A regulates signaling through CD150 (SLAM) in B cells. Blood. 2004;104(13):4063-70.
[23] Yurchenko M, Shlapatska LM, Romanets OL, Ganshevskiy D, Kashuba E, Zamoshnikova A, Ushenin YV, Snopok BA, Sidorenko SP. CD150-mediated Akt signalling pathway in normal and malignant B cells. Exp Oncol. 2011;33(1):9-18.
[24] Yurchenko MY, Kovalevska LM, Shlapatska LM, Berdova GG, Clark EA, Sidorenko SP. CD150 regulates JNK1/2 activation in normal and Hodgkin's lymphoma B cells. Immunol Cell Biol. 2010;88(5):565-74.
[25] Sidorenko SP SL, Vetrova EP, Berdova AG, Yurchenko OV, Klenova TT, Mikhalap SV, Abramenko IV, Gluzman DF. Monoclonal-antibodies IPO-38 recognizing the nuclear antigen of proliferating cells. Experimental Onology. 1994;16(2-3):145-9.
[26] Lopez F, Belloc F, Lacombe F, Dumain P, Reiffers J, Bernard P, Boisseau MR. The labelling of proliferating cells by Ki67 and MIB-1 antibodies depends on the binding of a nuclear protein to the DNA. Exp Cell Res. 1994;210(2):145-53.
[27] Sasaki K, Kurose A, Ishida Y. Flow cytometric analysis of the expression of PCNA during the cell cycle in HeLa cells and effects of the inhibition of DNA synthesis on it. Cytometry. 1993;14(8):876-82.
[28] Mikhalap SV, Shlapatskaya LN, Yurchenko OV, Berdova AG, Gluzman DF, Belloc F, Sidorenko SP. Monoclonal antibody IPO-38 recognizes a novel nuclear antigen of proliferating cells. Leucocyte Typing VI .-New York-London: Garland Publishing Inc., 1997; 609-10.