Biopolym. Cell. 2019; 35(4):303-312.
Структура та функції біополімерів
Отримання та характеристика клітинної лінії MCF-7 з нокаутом ізоформи р85 кінази 1 рибосомального білка S6 (р85-S6K1)
1Голяр В. В., 1Гоцуляк Н. Я., 1Хоруженко А. І., 1Заєць І. В.
  1. Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
    Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03143
Мета. Отримати клітини лінії MCF-7 з нокаутом p85-S6K1 ізоформи та оцінити внесок p85-S6K1 в регуляцію проліферації, міграції та виживання клітин. Методи. Вестерн-блот аналіз, система редагування геному CRISPR/Cas9, імунофлуоресцентне фарбування, MTT-тест, метод «раневої поверхні». Результати. Отримано два клони клітинної лінії MCF-7 з повною відсутністю експресії ізоформи р85-S6K1 та оцінено рівень їх виживання за присутності пероксиду водню, а також ступінь проліферації й міграції цих клітин. Клітини отриманої лінії демонструють зниження життєздатності в умовах оксидативного стресу, сповільнення темпів росту, рухливості та пригнічення рівня фосфорилювання rpS6 за Сер235/236/240/244 за відсутності стимуляції ростовими факторами у порівнянні з клітинами дикого типу. Висновки. Поточне дослідження припускає, що ізоформа р85-S6K1 може потенційно бути залученою до регуляції поведінки ракових клітин, сприяючи клітинному росту, міграції та виживанню. Клітинна лінія MCF-7 з нокаутом ізоформи р85-S6K1 може в подальшому бути використана для отримання більш повного розуміння різниці у функціонуванні ізоформ р85 та р70 кінази S6K1.
Keywords: mTOR/S6K1 сигналінг, CRISPR/Cas9, ізоформа p85-S6K1.