Biopolym. Cell. 2018; 34(3):196-206.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.00097A
Молекулярна та клітинна біотехнології
Удосконалене відновлення і кріозбереження сперматогоній щурів для створення банку чоловічих стовбурових клітин
1Сивик Т. Л., 1Дяченко Л. С., 2Сивик А. Є.
  1. Білоцерківський Національний аграрний університет
    Соборна площа,8/1, Біла Церква, Україна, 09117
  2. Blinn College
    902 College Ave, Бреннем, США, 77833

Abstract

Мета. Оптимізувати кріоконсервуючий розчин для сперматогонії і процедуру її відновлення. Методи. ПЛР, Тест на виживання клітин, Тест на формування сперматогональних колоний, імуноцитохімія, кріоконсервація и розморожування сперматогонії. Результати. Три мутовані сперматогональні стовбурові клітинні лінії Спляча Красуня після 17–24 місяців кріоконсервації були відновлені двома методами: традиційним – із застосуванням ламінінової селекції і новим методом селекції ССК у живильному середовищі на мишачих ембріональних фібробластах. Мутовані лінії ССК, відновлені двома методами, трансплантували у сім'яники самців-реципиєнтів. Були отримані трансгенні нащадки. Ми вдосконалили концентрацію ДМСО в розчині для заморожування ліній ССК. Висновки. Після виділення ССК із сім'янників щура і тривалого кріозбереження, оптимізована процедура відновлення їх у живильному середовищі дозволяє успішно отримувати трансгенні тварини із банку мутованих ліній ССК. Результати доводять доцільність включення 8 % ДМСО до складу живильного середовища для ССК з метою кріоконсервування.
Keywords: сперматогональні стовбурові клітини, мутовані лінії, ламінінова селекція, кріоконсервація
Повний текст: (PDF, англійською)

References

[1] Wu X, Goodyear SM, Abramowitz LK, Bartolomei MS, Tobias JW, Avarbock MR, Brinster RL. Fertile offspring derived from mouse spermatogonial stem cells cryopreserved for more than 14 years. Hum Reprod. 2012;27(5):1249-59.
[2] Liu S, Tang Z, Xiong T, Tang W. Isolation and characterization of human spermatogonial stem cells. Reprod Biol Endocrinol. 2011;9:141.
[3] Syvyk T, Syvyk A. Customized transgenesis via modification of spermatogonial stem cells. J Microbiol Biotechnol Food Sci . 2018; 7(5):475-9.
[4] Mays-Hoopes LL, Bolen J, Riggs AD, Singer-Sam J. Preparation of spermatogonia, spermatocytes, and round spermatids for analysis of gene expression using fluorescence-activated cell sorting. Biol Reprod. 1995;53(5):1003-11.
[5] Gassei K, Ehmcke J, Schlatt S. Efficient enrichment of undifferentiated GFR alpha 1+ spermatogonia from immature rat testis by magnetic activated cell sorting. Cell Tissue Res. 2009;337(1):177-83.
[6] Kanatsu-Shinohara M, Morimoto H, Shinohara T. Enrichment of Mouse Spermatogonial Stem Cells by the Stem Cell Dye CDy1. Biol Reprod. 2016;94(1):13.
[7] Kubota H, Brinster RL. Culture of rodent spermatogonial stem cells, male germline stem cells of the postnatal animal. Methods Cell Biol. 2008;86:59-84.
[8] Kanatsu-Shinohara M, Inoue K, Ogonuki N, Morimoto H, Ogura A, Shinohara T. Serum- and feeder-free culture of mouse germline stem cells. Biol Reprod. 2011;84(1):97-105.
[9] Wu Z, Falciatori I, Molyneux LA, Richardson TE, Chapman KM, Hamra FK. Spermatogonial culture medium: an effective and efficient nutrient mixture for culturing rat spermatogonial stem cells. Biol Reprod. 2009;81(1):77-86.
[10] Chapman KM, Saidley-Alsaadi D, Syvyk AE, Shirley JR, Thompson LM and Hamra FK. Spermatogonial Stem Cell Mediated Gene Transfer. Transgenic Technology, Eds. Shirley Springer Protocols Handbooks Springer Protocols Handbooks; 2011. 237-66 p.
[11] Ivics Z, Izsvák Z, Chapman KM, Hamra FK. Sleeping Beauty transposon mutagenesis of the rat genome in spermatogonial stem cells. Methods. 2011;53(4):356-65.
[12] Goodyear S, Brinster R. Spermatogonial Stem Cell Transplantation to the Testis. Cold Spring Harb Protoc. 2017;2017(4):pdb.prot094235.
[13] Syvyk A, Djachenko L, Syvyk T. Transgenesis through the spermatogonia stem cells in the animals and prospects of its application in Bilotserkiva NAU. Collection of scientific works of Bila Tserkva NAU. 2017; 1(134):5-12.
[14] Stacey GN, Masters JR. Cryopreservation and banking of mammalian cell lines. Nat Protoc. 2008;3(12):1981-9.
[15] Cronkhite JT, Norlander C, Furth JK, Levan G, Garbers DL, Hammer RE. Male and female germline specific expression of an EGFP reporter gene in a unique strain of transgenic rats. Dev Biol. 2005;284(1):171-83.
[16] Pegg DE. Principles of cryopreservation. Methods Mol Biol. 2015;1257:3-19.
[17] Mirzapour T, Movahedin M, Tengku Ibrahim TA, Haron AW, Nowroozi MR. Evaluation of the effects of cryopreservation on viability, proliferation and colony formation of human spermatogonial stem cells in vitro culture. Andrologia. 2013;45(1):26-34.