Biopolym. Cell. 2016; 32(1):34-40.
Геноміка, транскриптоміка та протеоміка
Кіназа фокальної адгезії (FAK1) регулює фосфорилювання адаптерного білка SHB та його взаємодію з низкою сигнальних білків.
1Дергай О. В., 1Яручик А. М., 1Риндич А. В.
- Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680
Abstract
Мета. Дослідити ефект надексперсії кінази фокальної адгезії (FAK1) на рівнь фосфорилювання залишків тирозину адапторного білка SHB та знайти функціональне значення цієї посттрансляційної модифікації. Методи. Конструювання рекомбінантних ДНК, експресія та очистка рекомбінантних білків, трасфекція клітинних ліній, вестерн блот. Результати. Надексперсія FAK1 в клітинах лінії 293 викликає масивне фосфорилювання залишків тирозину адапторного білка SHB та значно підсилює його взаємодію in vitro з SH2-доменами низки сигнальних білків, таких як PI3K, ABL, CRK та PLCg1. Крім того, білок LMP2A вірусу Епштейна-Барр може посилювати in vitro зв’язування SHB з вищезазначеними білками, так само, як і FAK1. Тоді як надекспресія окремих білків FAK1 та LMP2A підвищувала рівні фосфорилювання SHB, їх ко-експерсія не мала синергічного ефекту. Висновки. Експресія FAK1 та LMP2A індукує фосфорилювання залишків тирозину адапторного білка SHB та підсилює його взаємодію з SH2-доменами низки сигнальних білків.
Keywords: FAK1, SHB, LMP2A, фосфорилювання
Повний текст: (PDF, англійською)
References
[1]
Mon NN, Ito S, Senga T, Hamaguchi M. FAK signaling in neoplastic disorders: a linkage between inflammation and cancer. Ann N Y Acad Sci. 2006;1086:199-212.
[2]
Xia H, Nho RS, Kahm J, Kleidon J, Henke CA. Focal adhesion kinase is upstream of phosphatidylinositol 3-kinase/Akt in regulating fibroblast survival in response to contraction of type I collagen matrices via a beta 1 integrin viability signaling pathway. J Biol Chem. 2004;279(31):33024-34.
[3]
Schaller MD. Biochemical signals and biological responses elicited by the focal adhesion kinase. Biochim Biophys Acta. 2001;1540(1):1-21.
[4]
Chen HC, Guan JL. Association of focal adhesion kinase with its potential substrate phosphatidylinositol 3-kinase. Proc Natl Acad Sci U S A. 1994;91(21):10148-52.
[5]
Chen HC, Appeddu PA, Isoda H, Guan JL. Phosphorylation of tyrosine 397 in focal adhesion kinase is required for binding phosphatidylinositol 3-kinase. J Biol Chem. 1996;271(42):26329-34.
[6]
Nolan K, Lacoste J, Parsons JT. Regulated expression of focal adhesion kinase-related nonkinase, the autonomously expressed C-terminal domain of focal adhesion kinase. Mol Cell Biol. 1999;19(9):6120-9.
[7]
Han DC, Guan JL. Association of focal adhesion kinase with Grb7 and its role in cell migration. J Biol Chem. 1999;274(34):24425-30.
[8]
Holmqvist K, Cross M, Riley D, Welsh M. The Shb adaptor protein causes Src-dependent cell spreading and activation of focal adhesion kinase in murine brain endothelial cells. Cell Signal. 2003;15(2):171-9.
[9]
Gustafsson K, Jamalpour M, Trinh C, Kharas MG, Welsh M. The Src homology-2 protein Shb modulates focal adhesion kinase signaling in a BCR-ABL myeloproliferative disorder causing accelerated progression of disease. J Hematol Oncol. 2014;7:45.
[10]
Matskova LV, Helmstetter C, Ingham RJ, Gish G, Lindholm CK, Ernberg I, Pawson T, Winberg G. The Shb signalling scaffold binds to and regulates constitutive signals from the Epstein-Barr virus LMP2A membrane protein. Oncogene. 2007;26(34):4908-17.
[11]
Cross MJ, Lu L, Magnusson P, Nyqvist D, Holmqvist K, Welsh M, Claesson-Welsh L. The Shb adaptor protein binds to tyrosine 766 in the FGFR-1 and regulates the Ras/MEK/MAPK pathway via FRS2 phosphorylation in endothelial cells. Mol Biol Cell. 2002;13(8):2881-93.
[12]
Dergai O, Dergai M, Skrypkina I, Matskova L, Tsyba L, Gudkova D, Rynditch A. The LMP2A protein of Epstein-Barr virus regulates phosphorylation of ITSN1 and Shb adaptors by tyrosine kinases. Cell Signal. 2013;25(1):33-40.
[13]
Novokhatska O, Dergai M, Tsyba L, Skrypkina I, Filonenko V, Moreau J, Rynditch A. Adaptor proteins intersectin 1 and 2 bind similar proline-rich ligands but are differentially recognized by SH2 domain-containing proteins. PLoS One. 2013;8(7):e70546.
[14]
Golubovskaya VM, Zheng M, Zhang L, Li JL, Cance WG. The direct effect of focal adhesion kinase (FAK), dominant-negative FAK, FAK-CD and FAK siRNA on gene expression and human MCF-7 breast cancer cell tumorigenesis. BMC Cancer. 2009;9:280.
[15]
Dergai OV, Dergai MV, Gudkova DO, Tsyba LO, Skrypkina IYa, Rynditch AV. Interaction of ubiquitin ligase CBL with LMP2A protein of Epstein-Barr virus occurs via PTB domain of CBL and does not depend on adaptor ITSN1. Biopolym Cell. 2013; 29(2): 131–5.
[16]
Xue Y, Ren J, Gao X, Jin C, Wen L, Yao X. GPS 2.0, a tool to predict kinase-specific phosphorylation sites in hierarchy. Mol Cell Proteomics. 2008;7(9):1598-608.
[17]
Pawson T, Gish GD, Nash P. SH2 domains, interaction modules and cellular wiring. Trends Cell Biol. 2001;11(12):504-11.
[18]
Welsh M, Jamalpour M, Zang G, Åkerblom B. The role of the Src Homology-2 domain containing protein B (SHB) in β cells. J Mol Endocrinol. 2016;56(1):R21-31.
[19]
Gesbert F, Sellers WR, Signoretti S, Loda M, Griffin JD. BCR/ABL regulates expression of the cyclin-dependent kinase inhibitor p27Kip1 through the phosphatidylinositol 3-Kinase/AKT pathway. J Biol Chem. 2000;275(50):39223-30.
[20]
Hägerkvist R, Mokhtari D, Lindholm C, Farnebo F, Mostoslavsky G, Mulligan RC, Welsh N, Welsh M. Consequences of Shb and c-Abl interactions for cell death in response to various stress stimuli. Exp Cell Res. 2007;313(2):284-91.
[21]
Lu J, Lin WH, Chen SY, Longnecker R, Tsai SC, Chen CL, Tsai CH. Syk tyrosine kinase mediates Epstein-Barr virus latent membrane protein 2A-induced cell migration in epithelial cells. J Biol Chem. 2006;281(13):8806-14.
[22]
Fotheringham JA, Coalson NE, Raab-Traub N. Epstein-Barr virus latent membrane protein-2A induces ITAM/Syk- and Akt-dependent epithelial migration through αv-integrin membrane translocation. J Virol. 2012;86(19):10308-20.
