Детекція генів стійкості до стресових факторів у трансгенної кукурудзи за допомогою мультиплексної та низхідної полімеразних ланцюговоих реакцій

Банникова, М. О.

doi:10.7124/bc.0008F8

Biopolym. Cell. 2015; 31(5):362-370.

http://dx.doi.org/10.7124/bc.0008F8

Молекулярна та клітинна біотехнології

Детекція генів стійкості до стресових факторів у трансгенної кукурудзи за допомогою мультиплексної та низхідної полімеразних ланцюговоих реакцій

1Банникова М. О.

Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
вул. Академіка Заболотного, 148, Київ, Україна, 03680

Abstract

Мета. Розробити методику детекції генів стійкості до стресових факторів у трансгенної кукурудзи на основі мультиплексної (мПЛР) та низхідної (touchdown PCR) полімеразних ланцюгових реакцій. Методи. Виділення загальної ДНК ЦТАБ методом, очистка ДНК від білків та РНК, електрофорез загальної ДНК та продуктів ампліфікації в агарозному гелі, полімеразна ланцюгова реакція. Результати. Розроблено методики мПЛР та низхідної ПЛР, котрі дозволяють одночасно перевіряти якість загальної ДНК, яку виділили з досліджуваних рослинних зразків кукурудзи, та детектувати гени стійкості до стресових факторів, що входять до складу трансформаційних подій кукурудзи BT176, MON810, MON88017, DAS1507, DAS59122, MIR604, GA21, NK603 (мПЛР) та Bt11, MON863, MON89034, T25 (низхідна ПЛР). мПЦР та низхідна ПЦР розроблені з використанням референтних зразків. Висновки. Методика може бути використана для масового аналізу зразків кукурудзи. За допомогою мультиплексної та низхідної ПЛР можна надійно, достовірно, швидко та досить дешево виявляти гени толерантності/стійкості до гербіцидів і гени стійкості до комах шкідників.

Keywords: детекція генів, кукурудза, мультиплексна та низхідна полімеразна ланцюгова реакція.

Повний текст: (PDF, англійською)

References

[1] European Commission, Joint Research Centre. Compendium of reference methods for GMO analysis. Publications Office of the European Union. 2010; 261 p.

[2] Somma M. Extraction and Purification of DNA. Session 4. In: Training Course on the Analysis of Food Samples for the Presence of Genetically Modified Organisms. User Manual. Eds M. Querci, M. Jermini, G. Van den Eede. European Commission, DG Joint Research Centre, Institute for Health and Consumer Protection. Luxembourg, 2006; 229 p.

[3] Ausubel FM, Brent R, Kingston RE, Moore DD, Seidman JG, Smith JA, Struhl K. Eds. Current Protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons Inc., 2003; 1600 p.

[4] Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T. Eds. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, USA, 2nd ed., 1989; 1234 p.

[5] Yoke-Kqueen C, Yee-Tyan C, Siew-Ping K, Son R. Development of multiplex-PCR for Genetically Modified Organism (GMO) detection targeting EPSPS and Cry1Ab genes in soy and maize samples. International Food Research Journal. 2011; 18: 515-22.

[6] Pat. 77768 of Ukraine, MPK C12N 15/31; C12N 15/32; C12N 15/82; C12Q 1/68; C12P 19/34. Method of detecting maize transformation event NK603 in a genetically modified plant by mPCR. Morgun BV, Fedorenko TV, Markovsky OV, Bannikova MO. No. u2012 10121; appl. dated August 23, 2012; publ. February 25, 2013, Bul. N 4.

[7] Pat. 77769 of Ukraine, MPK C12N 15/31; C12N 15/32; C12N 15/82; C12Q 1/68; C12P 19/34. Method of detecting maize transformation event NK603 in a genetically modified plant by mPCR. Morgun BV, Fedorenko TV, Markovsky OV, Bannikova MO. U. No. u2012 10122; appl. dated August 23, 2012; publ. February 25, 2013, Bul. No.4.

[8] Huang HY, Pan TM. Detection of genetically modified maize MON810 and NK603 by multiplex and real-time polymerase chain reaction methods. J Agric Food Chem. 2004;52(11):3264-8.

[9] Don RH, Cox PT, Wainwright BJ, Baker K, Mattick JS. 'Touchdown' PCR to circumvent spurious priming during gene amplification. Nucleic Acids Res. 1991;19(14):4008.

[10] Hecker KH, Roux KH. High and low annealing temperatures increase both specificity and yield in touchdown and stepdown PCR. Biotechniques. 1996;20(3):478-85.

[11] Pat. 0070139 USA. A01H 5/00, C12Q 1/68, C07H 21/04, C12N 15/82, C12N 5/04, A01H 1/00. Corn Event DAS-59122-7 and Methods for Detection Thereof. Bing JW, Cressman RF JR, Gupta M, Hakimi SM at all; Pioneer Hi-Bred international, Inc.; Dow AgroSciences LLC. E.I. DuPont deNemours and Company. Publ date Mar 30, 2006. Pub. No:US2006/0070139 A1.