Biopolym. Cell. 2015; 31(4):279-284.
Молекулярна та клітинна біотехнології
Створення хроматографічного сорбенту на основі іммобілізованих одноланцюгових антитіл для афінного виділення рекомбінантного IFN-β1b людини
1, 2Похоленко Я. О., 1, 2Горбатюк О. Б., 1, 2Окунєв О. В., 1, 2Іродов Д. М., 1Дегтярьова М. І., 1, 2Паливода О. Г., 1, 2Кордюм В. А.
  1. Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
    Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680
  2. ДУ «Інститут генетичної і регенеративної медицини НАМН України»
    вул. Вишгородська, 67, Київ, Україна, 04114

Abstract

Мета. Розробити лабораторний метод створення імуноафінного хроматографічного сорбенту для виділення та очищення рекомбінантного IFN-β1b людини. Методи. Викорис­то­ву­ючи послідовності ДНК, які кодують ScFv специфічні до hIFN-β1b, та целюлозозв’язувальний домен (CBD) Clostri­di­um thermocellum, створено ген химерного протеїну ScFvbINF-CBD. Проведено експресію створеного химерного протеїну в клітинах Escherichia coli. Цільовий білок одержували у розчинній, функціонально активній формі шляхом ренатурації з бактеріальних тілець включення in vitro. ScFvbINF-CBD іммобілізували на хітиновому носії. Результати. Вве­дення CBD до складу химерного білка забезпечує орієнтовану, не ковалентну іммобілізацію ScFvbINF-CBD на хроматографічній матриці. За допомогою створеного імуноафінного сорбенту було виділено rhIFN-β1b зі складної суміші білків, одержаної після його ренатурації з тілець включення, з чистотою більше ніж 89 %. Висновки. Створений імуноафінний хроматографічний сорбент дозволяє виділяти рекомбінантний IFN-β1b людини зі складних сумішей білків.
Keywords: інтерферон-β1b, одноланцюгові ан­ти­ті­ла, імуноафінне очищення, целюлозозв’язувальний домен.

References

[1] Blank K, Lindner P, Diefenbach B, Plückthun A. Self-im­mobilizing recombinant antibody fragments for immunoaffinity chromatography: generic, parallel, and scalable protein purification. Protein Expr Purif. 2002;24(2):313–22.
[2] Berry MJ, Davies J, Smith CG, Smith I. Immobilization of Fv antibody fragments on porous silica and their utility in affinity chromatography. J Chromatogr. 1991;587(2):161-9.
[3] Compston A, Coles A. Multiple sclerosis. Lancet. 2008;372(9648):1502-17.
[4] Minagar A. Current and future therapies for multiple sclerosis. Scientifica (Cairo). 2013;2013:249101.
[5] Pavlova MV, Nikolaev IuS, Irodov DM, Okunev OV, Kordium VA, Gil'chuk PV. [Characterization of a panel of mouse single-chain antibodies against recombinant human interferon beta1b]. Tsitol Genet. 2008;42(4):3-11.
[6] Gilchuk PV, Okunev OV, Irodov DM, Pavlova MV, Yakovenko OYa. Immobilized single chain antibodies for affinity purification of recombinant human IFN-α2b. Biopolym Cell. 2006; 22(2):157–61.
[7] Studier FW. Protein production by auto-induction in high density shaking cultures. Protein Expr Purif. 2005;41(1):207-34.
[8] The Protein Protocols Handbook. Ed. Walker JM. Humana Press Inc. 2009 1984 p.
[9] Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T. Molecular cloning: A laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor Lab. press, 1989.
[10] Morag E, Lapidot A, Govorko D, Lamed R, Wilchek M, Bayer EA, Shoham Y. Expression, purification, and characterization of the cellulose-binding domain of the scaffoldin subunit from the cellulosome of Clostridium thermocellum. Appl Environ Microbiol. 1995;61(5):1980-6.
[11] Bayer EA, Morag E, Lamed R. The cellulosome--a treasure-trove for biotechnology. Trends Biotechnol. 1994;12(9):379-86.
[12] Lehtiö J, Sugiyama J, Gustavsson M, Fransson L, Linder M, Teeri TT. The binding specificity and affinity determinants of family 1 and family 3 cellulose binding modules. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003;100(2):484-9.
[13] Guo JQ, You SY, Li L, Zhang YZ, Huang JN, Zhang CY. Construction and high-level expression of a single-chain Fv antibody fragment specific for acidic isoferritin in Esche­richia coli. J Biotechnol. 2003;102(2):177–89.
[14] Tormo J, Lamed R, Chirino AJ, Morag E, Bayer EA, Shoham Y, Steitz TA. Crystal structure of a bacterial family-III cellulose-binding domain: a general mechanism for attachment to cellulose. EMBO J. 1996;15(21):5739-51.