Biopolym. Cell. 2014; 30(1):37-41.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.00087A
Структура та функції біополімерів
Взаємодія між адаптерними білками Ruk/CIN85 і Tks4 у нормальних і пухлинних клітинах різного тканинного походження
1Базалій А. В., 1Самойленко А. А., 1Петухов Д. М., 2Риндич А. В., 3Редовіч М.-Й., 1Дробот Л. Б.
  1. Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України
    вул. Леонтовича, 9, Київ, Україна, 01601
  2. Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
    Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680
  3. Інститут експериментальної біології ім. М. Ненского, Польська академія наук
    вул. Пастера 3, Варшава, Польща, 02-093

Abstract

Мета. З’ясувати особливості взаємодії окремих доменів SH3 адаптерного білка Ruk/CIN85 з ендогенним адаптерним білком Tks4 у нормальних і пухлинних клітинах різного тканинного походження. Методи. Аналіз GST in vitro pull-down проводили з використанням загальних клітинних лізатів ліній клітин різного тканинного походження. Результати. Встановлено, що домен SH3А адаптерного білка Ruk/CIN85 преципітує повнорозмірну форму адаптерного білка Tks4 (Mr 120 кДа) з лізатів пухлинних клітин молочної залози (MCF-7, MDA-MB-231), меланоми (MM-4), ободової кишки (HT-29, DLD-1) людини, а також карциноми легені Льюїс (LLC) та фібробластів (NIH 3T3) миші. Виявлено також, що всі домени SH3 білка Ruk/CIN85 (А, В і С) з високою ефективністю преципітують додаткові форми Tks4 з Mr 75, 90 і 160 кДа з лізатів клітин карциноми ободової кишки людини та фібробластів миші. Молекулярну природу нових множинних форм Tks4 на сьогодні не встановлено. Висновки. Ідентифіковано нові множинні молекулярні форми адаптерного білка Tks4 з Mr 75, 90 і 160 кДа, здатні з високою афінністю взаємодіяти з доменами SH3 білка Ruk/CIN85. Отримані дані дозволяють припустити, що можливість зв’язування доменів SH3 Ruk/CIN85 з ендогенними формами білка Tks4 обумовлена клітинним контекстом, тоді як рівень взаємодії регулюється в процесі реалізації фізіологічних відповідей клітин.
Keywords: адаптерні білки, Ruk/CIN85, Tks4, домени SH3, аналіз GST in vitro pull-down
Повний текст: (PDF, англійською)

References

[1] Pawson T. Dynamic control of signaling by modular adaptor proteins. Curr Opin Cell Biol 2007; 19(2):112–16.
[2] Buschman MD, Bromann PA, Cejudo-Martin P, Wen F, Pass I, Courtneidge SA. The novel adaptor protein Tks4 (SH3PXD2B) is required for functional podosome formation. Mol Biol Cell. 2009; 20(5):1302–11.
[3] Gout I, Middleton G, Adu J, Ninkina NN, Drobot LB, Filonenko V, Matsuka G, Davies AM, Waterfield M, Buchman VL. Negative regulation of PI 3-kinase by Ruk, a novel adaptor protein. EMBO J. 2000; 19(15):4015–25.
[4] Courtneidge SA. Cell migration and invasion in human disease: the Tks adaptor proteins. Biochem Soc Trans. 2011; 40(1): 129–32.
[5] Havrylov S, Redowicz MJ, Buchman VL. Emerging roles of Ruk/ CIN85 in vesicle-mediated transport, adhesion, migration and malignancy. Traffic. 2010; 11(6):721–31.
[6] Havrylov S, Rzhepetskyy Y, Malinowska A, Drobot L, Redowicz MJ. Proteins recruited by SH3 domains of Ruk/CIN85 adaptor identified by LC-MS/MS. Proteome Sci. 2009; 7:21.
[7] Samoylenko A, Vynnytska-Myronovska B, Byts N, Kozlova N, Basaraba O, Pasichnyk G, Palyvoda K, Bobak Y, Barska M, Mayevska O, Rzhepetsky Y, Shuvayeva H, Lyzogubov V, Usenko V, Savran V, Volodko N, Buchman V, Kietzmann T, Drobot L. Increased levels of the HER1 adaptor protein Rukl/ CIN85 contribute to breast cancer malignancy. Carcinogenesis. 2012; 33(10): 1976–84.
[8] Rzepetsky YuA, Samoylenko AA, Kukharenko OP, Mikhalap SV, Sidorenko SP, Hausser A, Drobot LB. Protein kinase D interacts with adaptor protein Ruk/CIN85 and phosphory lates it. Stud biol. 2009; 3(3):17–28.
[9] Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970; 227(5259): 680–85.
[10] Towbin H, Staehelin T, Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc Natl Acad Sci USA. 1979; 76(9):4350–54.
[11] Venter JC, Adams MD, Myers EW, Li PW, Mural RJ, Sutton GG. et al. The sequence of the human genome. Science. 2001; 291 (5507):1304–51.