Biopolym. Cell. 2013; 29(2):131-135.
Геноміка, транскриптоміка та протеоміка
Взаємодія убіквітин-лігази CBL з білком LMP2A вірусу
Епштейна-Барр здійснюється за посередництвом РТВ-домену
та не залежить від адаптерного білка ITSN1
1Дергай О. В., 1Дергай М. В., 1Гудкова Д. О., 1Циба Л. О., 1Скрипкіна І. Я., 1Риндич А. В.
- Державна ключова лабораторія молекулярної і клітинної біології
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680
Abstract
Відомо, що мембранний білок латентної фази 2А вірусу Епштейна-Барр убіквітинілюється убіквітин-лігазою CBL, хоча прямої взаємодії цих двох білків не виявлено. Наша мета полягала у дослідженні взаємодії LMP2A і CBL та вивченні можливості участі в цьому комплексі білкового адаптера. Беручи до уваги, що обидва зазначених білки взаємодіють з ендоцитозним адаптерним білком ITSN1, ми припустили, що останній може слугувати платформою для утворення комплексу LMP2A/CBL. Методи. Імунофлуоресцентний аналіз та коімунопреципітацію застосовано для дослідження можливості формування комплексу між ITSN1, CBL і LMP2A. Результати. Коімунопреципітація LMP2A і CBL свідчить про утворення комплексу цими білками, причому мутантна форма CBL, яка не здатна зв’язувати фосфотирозинові залишки, не взаємодіє з LMP2A. Ми спостерігали потрійну колокалізацію ITSN1, CBL і LMP2A у клітинах лінії MCF-7, а також коімунопреципітацію всіх зазначених білків. Надекспресія ITSN1 не впливає на ефективність коімунопреципітації LMP2A з CBL. Більш того, мутантний варіант LMP2A, не здатний зв’язуватися із ITSN1, ефективно взаємодіє з CBL. Висновки. LMP2A може входити до комплексу ендоцитозного адаптерного білка ITSN1 та убіквітин-лігази CBL. Участь ITSN1 не є необхідною для формування комплексу між LMP2A і CBL. Показано, що РТВ-домен убіквітин-лігази CBL відповідає за зв’язування з LMP2A.
Keywords: інтерсектин 1, CBL, LMP2A, вірус Епштейна-Барр
Повний текст: (PDF, англійською)
References
[1]
Pang M. F., Lin K. W., Peh S. C. The signaling pathways of Epstein-Barr virus-encoded latent membrane protein 2A (LMP2A) in latency and cancer Cell Mol. Biol. Lett 2009 14, N 2 P. 222–247.
[2]
Heussinger N., Buttner M., Ott G., Brachtel E., Pilch B. Z., Kremmer E., Niedobitek G. Expression of the Epstein-Barr virus (EBV)-encoded latent membrane protein 2A (LMP2A) in EBVassociated nasopharyngeal carcinoma J. Pathol 2004 203, N 2 P. 696–699.
[3]
Miller C. L., Lee J. H., Kieff E., Longnecker R. An integral membrane protein (LMP2) blocks reactivation of Epstein-Barr virus from latency following surface immunoglobulin crosslinking Proc. Natl Acad. Sci. USA 1994 91, N 2 P. 772–776.
[4]
Swart R., Ruf I. K., Sample J., Longnecker R. Latent membrane protein 2A-mediated effects on the phosphatidylinositol 3-Kinase/Akt pathway J. Virol 2000 74, N 22 P. 10838–10845.
[5]
Fukuda M., Longnecker R. Epstein-Barr virus latent membrane protein 2A mediates transformation through constitutive activation of the Ras/PI3-K/Akt Pathway J. Virol 2007 81, N 17 P. 9299–9306.
[6]
Schaadt E., Baier B., Mautner J., Bornkamm G. W., Adler B. Epstein-Barr virus latent membrane protein 2A mimics B-cell receptor-dependent virus reactivation J. Gen. Virol 2005 86, Pt 3 P. 551–559.
[7]
Mancao C., Hammerschmidt W. Epstein-Barr virus latent membrane protein 2A is a B-cell receptor mimic and essential for Bcell survival Blood 2007 110, N 10 P. 3715–3721.
[8]
Winberg G., Matskova L., Chen F., Plant P., Rotin D., Gish G., Ingham R., Ernberg I., Pawson T. Latent membrane protein 2A of Epstein-Barr virus binds WW domain E3 protein-ubiquitin ligases that ubiquitinate B-cell tyrosine kinases Mol. Cell. Biol 2000 20, N 22 P. 8526–8535.
[9]
Ikeda A., Caldwell R. G., Longnecker R., Ikeda M. Itchy, a Nedd4 ubiquitin ligase, downregulates latent membrane protein 2A activity in B-cell signaling J. Virol 2003 77, N 9 P. 5529–5534.
[10]
Ikeda M., Longnecker R. The c-CBL proto-oncoprotein downregulates EBV LMP2A signaling Virology 2009 385, N 1 P. 183–191.
[11]
Martin N. P., Mohney R. P., Dunn S., Das M., Scappini E., O'Bryan J. P. Intersectin regulates epidermal growth factor receptor endocytosis, ubiquitylation, and signaling Mol. Pharmacol 2006 70, N 5 P. 1643–1653.
[12]
Dergai M., Skrypkina I., Dergai O., Tsyba L., Novokhatska O., Filonenko V., Drobot L., Rynditch A. Identification and characterization of a novel mammalian isoform of the endocytic adaptor ITSN1 Gene 2011 485, N 2 P. 120–129.
[13]
Dergai O., Dergai M., Skrypkina I., Matskova L., Tsyba L., Gudkova D., Rynditch A. The LMP2A protein of Epstein-Barr virus regulates phosphorylation of ITSN1 and Shb adaptors by tyrosine kinases Cell Signal 2013 25, N 1 P. 33–40.
[14]
Pechstein A., Shupliakov O., Haucke V. Intersectin 1: a versatile actor in the synaptic vesicle cycle Biochem. Soc. Trans 2010 38, Pt 1 P. 181–186.
[15]
Tsyba L., Nikolaienko O., Dergai O., Dergai M., Novokhatska O., Skrypkina I., Rynditch A. Intersectin multidomain adaptor proteins: regulation of functional diversity Gene 2011 473, N 2 P. 67–75.
[16]
Henne W. M., Boucrot E., Meinecke M., Evergren E., Vallis Y., Mittal R., McMahon H. T. FCHo proteins are nucleators of clathrin-mediated endocytosis Science 2010 328, N 5983 P.1281–1284.
[17]
Dergai O., Novokhatska O., Dergai M., Skrypkina I., Tsyba L., Moreau J., Rynditch A. Intersectin 1 forms complexes with SGIP1 and Reps1 in clathrin-coated pits Biochem. Biophys. Res. Commun 2010 402, N 2 P. 408–413.
[18]
Dergai O. V., Dergai M. V., Skrypkina I. Ya., Tsyba L. O., Yaruchik A. M., Rynditch A. V. Amphiphysin 1 and 2 interact with latent membrane protein 2A of Epstein-Barr virus and regulate its exosomal secretion Biopolym. Cell 2012 28, N 3 P. 243– 238.
[19]
Nikolaienko O., Skrypkina I., Tsyba L., Fedyshyn Y., Morderer D., Buchman V., de la Luna S., Drobot L., Rynditch A. Intersectin 1 forms a complex with adaptor protein Ruk/CIN85 in vivo independently of epidermal growth factor stimulation Cell Signal 2009 21, N 5 P. 753–759.
[20]
Morderer D., Nikolaienko O., Skrypkina I., Cherkas V., Tsyba L., Belan P., Rynditch A. Endocytic adaptor protein intersectin 1 forms a complex with microtubule stabilizer STOP in neurons Gene 2012 505, N 2 P. 360–364.
[21]
Joazeiro C. A., Wing S. S., Huang H., Leverson J. D., Hunter T., Liu Y. C. The tyrosine kinase negative regulator c-Cbl as a RING-type, E2-dependent ubiquitin-protein ligase Science 1999 286, N 5438 P. 309–312.
[22]
Schmidt M. H., Dikic I. The CBL interactome and its functions Nat. Rev. Mol. Cell. Biol 2005 6, N 12 P. 907–918.
[23]
Rao N., Dodge I., Band H. The CBL family of ubiquitin ligases: critical negative regulators of tyrosine kinase signaling in the immune system J. Leukoc. Biol 2002 71, N 5 P. 753–763.
