Biopolym. Cell. 2013; 29(2):131-135.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.000810
Геноміка, транскриптоміка та протеоміка
Взаємодія убіквітин-лігази CBL з білком LMP2A вірусу Епштейна-Барр здійснюється за посередництвом РТВ-домену та не залежить від адаптерного білка ITSN1
1Дергай О. В., 1Дергай М. В., 1Гудкова Д. О., 1Циба Л. О., 1Скрипкіна І. Я., 1Риндич А. В.
  1. Державна ключова лабораторія молекулярної і клітинної біології
    Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
    вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680

Abstract

Відомо, що мембранний білок латентної фази 2А вірусу Епштейна-Барр убіквітинілюється убіквітин-лігазою CBL, хоча прямої взаємодії цих двох білків не виявлено. Наша мета полягала у дослідженні взаємодії LMP2A і CBL та вивченні можливості участі в цьому комплексі білкового адаптера. Беручи до уваги, що обидва зазначених білки взаємодіють з ендоцитозним адаптерним білком ITSN1, ми припустили, що останній може слугувати платформою для утворення комплексу LMP2A/CBL. Методи. Імунофлуоресцентний аналіз та коімунопреципітацію застосовано для дослідження можливості формування комплексу між ITSN1, CBL і LMP2A. Результати. Коімунопреципітація LMP2A і CBL свідчить про утворення комплексу цими білками, причому мутантна форма CBL, яка не здатна зв’язувати фосфотирозинові залишки, не взаємодіє з LMP2A. Ми спостерігали потрійну колокалізацію ITSN1, CBL і LMP2A у клітинах лінії MCF-7, а також коімунопреципітацію всіх зазначених білків. Надекспресія ITSN1 не впливає на ефективність коімунопреципітації LMP2A з CBL. Більш того, мутантний варіант LMP2A, не здатний зв’язуватися із ITSN1, ефективно взаємодіє з CBL. Висновки. LMP2A може входити до комплексу ендоцитозного адаптерного білка ITSN1 та убіквітин-лігази CBL. Участь ITSN1 не є необхідною для формування комплексу між LMP2A і CBL. Показано, що РТВ-домен убіквітин-лігази CBL відповідає за зв’язування з LMP2A.
Keywords: інтерсектин 1, CBL, LMP2A, вірус Епштейна-Барр
Повний текст: (PDF, англійською)

References

[1] Pang M. F., Lin K. W., Peh S. C. The signaling pathways of Epstein-Barr virus-encoded latent membrane protein 2A (LMP2A) in latency and cancer Cell Mol. Biol. Lett 2009 14, N 2 P. 222–247.
[2] Heussinger N., Buttner M., Ott G., Brachtel E., Pilch B. Z., Kremmer E., Niedobitek G. Expression of the Epstein-Barr virus (EBV)-encoded latent membrane protein 2A (LMP2A) in EBVassociated nasopharyngeal carcinoma J. Pathol 2004 203, N 2 P. 696–699.
[3] Miller C. L., Lee J. H., Kieff E., Longnecker R. An integral membrane protein (LMP2) blocks reactivation of Epstein-Barr virus from latency following surface immunoglobulin crosslinking Proc. Natl Acad. Sci. USA 1994 91, N 2 P. 772–776.
[4] Swart R., Ruf I. K., Sample J., Longnecker R. Latent membrane protein 2A-mediated effects on the phosphatidylinositol 3-Kinase/Akt pathway J. Virol 2000 74, N 22 P. 10838–10845.
[5] Fukuda M., Longnecker R. Epstein-Barr virus latent membrane protein 2A mediates transformation through constitutive activation of the Ras/PI3-K/Akt Pathway J. Virol 2007 81, N 17 P. 9299–9306.
[6] Schaadt E., Baier B., Mautner J., Bornkamm G. W., Adler B. Epstein-Barr virus latent membrane protein 2A mimics B-cell receptor-dependent virus reactivation J. Gen. Virol 2005 86, Pt 3 P. 551–559.
[7] Mancao C., Hammerschmidt W. Epstein-Barr virus latent membrane protein 2A is a B-cell receptor mimic and essential for Bcell survival Blood 2007 110, N 10 P. 3715–3721.
[8] Winberg G., Matskova L., Chen F., Plant P., Rotin D., Gish G., Ingham R., Ernberg I., Pawson T. Latent membrane protein 2A of Epstein-Barr virus binds WW domain E3 protein-ubiquitin ligases that ubiquitinate B-cell tyrosine kinases Mol. Cell. Biol 2000 20, N 22 P. 8526–8535.
[9] Ikeda A., Caldwell R. G., Longnecker R., Ikeda M. Itchy, a Nedd4 ubiquitin ligase, downregulates latent membrane protein 2A activity in B-cell signaling J. Virol 2003 77, N 9 P. 5529–5534.
[10] Ikeda M., Longnecker R. The c-CBL proto-oncoprotein downregulates EBV LMP2A signaling Virology 2009 385, N 1 P. 183–191.
[11] Martin N. P., Mohney R. P., Dunn S., Das M., Scappini E., O'Bryan J. P. Intersectin regulates epidermal growth factor receptor endocytosis, ubiquitylation, and signaling Mol. Pharmacol 2006 70, N 5 P. 1643–1653.
[12] Dergai M., Skrypkina I., Dergai O., Tsyba L., Novokhatska O., Filonenko V., Drobot L., Rynditch A. Identification and characterization of a novel mammalian isoform of the endocytic adaptor ITSN1 Gene 2011 485, N 2 P. 120–129.
[13] Dergai O., Dergai M., Skrypkina I., Matskova L., Tsyba L., Gudkova D., Rynditch A. The LMP2A protein of Epstein-Barr virus regulates phosphorylation of ITSN1 and Shb adaptors by tyrosine kinases Cell Signal 2013 25, N 1 P. 33–40.
[14] Pechstein A., Shupliakov O., Haucke V. Intersectin 1: a versatile actor in the synaptic vesicle cycle Biochem. Soc. Trans 2010 38, Pt 1 P. 181–186.
[15] Tsyba L., Nikolaienko O., Dergai O., Dergai M., Novokhatska O., Skrypkina I., Rynditch A. Intersectin multidomain adaptor proteins: regulation of functional diversity Gene 2011 473, N 2 P. 67–75.
[16] Henne W. M., Boucrot E., Meinecke M., Evergren E., Vallis Y., Mittal R., McMahon H. T. FCHo proteins are nucleators of clathrin-mediated endocytosis Science 2010 328, N 5983 P.1281–1284.
[17] Dergai O., Novokhatska O., Dergai M., Skrypkina I., Tsyba L., Moreau J., Rynditch A. Intersectin 1 forms complexes with SGIP1 and Reps1 in clathrin-coated pits Biochem. Biophys. Res. Commun 2010 402, N 2 P. 408–413.
[18] Dergai O. V., Dergai M. V., Skrypkina I. Ya., Tsyba L. O., Yaruchik A. M., Rynditch A. V. Amphiphysin 1 and 2 interact with latent membrane protein 2A of Epstein-Barr virus and regulate its exosomal secretion Biopolym. Cell 2012 28, N 3 P. 243– 238.
[19] Nikolaienko O., Skrypkina I., Tsyba L., Fedyshyn Y., Morderer D., Buchman V., de la Luna S., Drobot L., Rynditch A. Intersectin 1 forms a complex with adaptor protein Ruk/CIN85 in vivo independently of epidermal growth factor stimulation Cell Signal 2009 21, N 5 P. 753–759.
[20] Morderer D., Nikolaienko O., Skrypkina I., Cherkas V., Tsyba L., Belan P., Rynditch A. Endocytic adaptor protein intersectin 1 forms a complex with microtubule stabilizer STOP in neurons Gene 2012 505, N 2 P. 360–364.
[21] Joazeiro C. A., Wing S. S., Huang H., Leverson J. D., Hunter T., Liu Y. C. The tyrosine kinase negative regulator c-Cbl as a RING-type, E2-dependent ubiquitin-protein ligase Science 1999 286, N 5438 P. 309–312.
[22] Schmidt M. H., Dikic I. The CBL interactome and its functions Nat. Rev. Mol. Cell. Biol 2005 6, N 12 P. 907–918.
[23] Rao N., Dodge I., Band H. The CBL family of ubiquitin ligases: critical negative regulators of tyrosine kinase signaling in the immune system J. Leukoc. Biol 2002 71, N 5 P. 753–763.