Biopolym. Cell. 2013; 29(1):75-78.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.000809
Методи
Можливість підтримання культури мезенхімальних стовбурових клітин за рахунок клітин зі зниженим ступенем адгезії
1Шувалова Н. С., 1Маслова О. О., 1Сухорада О. М., 1Дерябіна О. Г., 1Кордюм В. А.
  1. Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
    Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680

Abstract

Мета. Застосування класичних методик для відкріплення мезенхімальних стовбурових клітин (МСК) від субстрату призводить до змін їхніх властивостей. У даному повідомленні запропоновано простий і доступний спосіб збереження популяції клітин, що уникли впливів на поверхневий апарат. Методи. МСК з матриксу пупкового канатика людини отримували і культивували за стандартною методикою. При заміні культурального середовища на свіжу порцію кондиціоноване середовище, у якому культури знаходилися впродовж трьох днів і яке потенційно містило спонтанно відкріплені клітини, переносили в інший культуральний посуд, додаючи сироватку та ростові фактори. Результати. Через добу після перенесення середовища на дні культурального посуду можна було спостерігати прикріплені клітини типової для МСК морфології, які мали ступінь експресії поверхневих маркерів та клоногенний потенціал, аналогічні таким у культур, пасованих за стандартною методикою. Висновки. Дочірня культура, отримана внаслідок збереження клітин, які спонтанно відкріпились у процесі заміни культурального середовища, фактично, зберігає властивості клітин вихідного пасажу. Запропонований метод доцільно застосовувати додатково до стандартної методики пасування. Це дозволить постійно мати пул клітин, які уникли пошкоджуючих впливів на білки і глікопротеїни поверхні клітини.
Keywords: МСК, культивування, клітини зі зниженим ступенем адгезії
Повний текст: (PDF, російською) (PDF, англійською)

References

[1] Nombela-Arrieta C., Ritz J., Silberstein L. 2011 The elusive nature and function of mesenchymal stem cells Nat. Rev. Mol. Cell Biol 12, N 2:126–131.
[2] Heng B. C., Cowan C. M., Basu S. 2009 Comparison of enzymatic and non-enzymatic means of dissociating adherent monolayers of mesenchymal stem cells Biol. Proced. Online 11;161–169.
[3] Rombouts W. J., Ploemacher R. E. 2003 Primary murine MSC show highly efficient homing to the bone marrow but lose homing ability following culture Leukemia 17, N 1:160–170.
[4] Augello A., Kurth T. B., De Bari C. 2010 Mesenchymal stem cells: a perspective from in vitro cultures to in vivo migration and niches Eur. Cell Mater 20:121–133.
[5] Reilly G. C., Engler A. J. 2010 Intrinsic extracellular matrix properties regulate stem cell differentiation J. Biomech 43, N 1 P. 55–62.
[6] Toyoda M., Takahashi H., Umezawa A. 2007 Ways for a mesenchymal stem cell to live on its own: maintaining an undifferentiated state ex vivo Int. J. Hematol 86, N 1:1–4.
[7] Wagner W., Horn P., Castoldi M., Diehlmann A., Bork S., Saffrich R., Benes V., Blake J., Pfister S., Eckstein V., Ho A. D. 2008 Replicative senescence of mesenchymal stem cells: a continuous and organized process PLoS One 3, N 5 e2213.
[8] Angelucci S., Marchisio M., Di Giuseppe F., Pierdomenico L., Sulpizio M., Eleuterio E., Lanuti P., Sabatino G., Miscia S., Di Ilio C. 2010 Proteome analysis of human Wharton's jelly cells during in vitro expansion Proteome Sci 8:18.
[9] Sarkar D., Spencer J. A., Phillips J. A., Zhao W., Schafer S., Spelke D. P., Mortensen L. J., Ruiz J. P., Vemula P. K., Sridharan R., Kumar S., Karnik R., Lin C. P., Karp J. M. 2011 Engineered cell homing Blood 118, N 25 e184–191.
[10] Majd H., Wipff P. J., Buscemi L., Bueno M., Vonwil D., Quinn T. M., Hinz B. 2009 A novel method of dynamic culture surface expansion improves mesenchymal stem cell proliferation and phenotype Stem Cells 27, N 1:200–209.
[11] Majd H., Quinn T. M., Wipff P. J., Hinz B. 2011 Dynamic expansion culture for mesenchymal stem cells Methods Mol. Biol 698:175–188.
[12] Witte H., Stubenrauch M., Frober U., Fischer R., Voges D., Hoffmann M. 2011 Integration of 3-D cell cultures in fluidic microsystems for biological screenings Eng. Life Sci 11, N 2:140–147.
[13] Tong C. K., Vellasamy S., Tan B. C., Abdullah M., Vidyadaran S., Seow H. F., Ramasamy R. 2011 Generation of mesenchymal stem cell from human umbilical cord tissue using a combination enzymatic and mechanical disassociation method Cell Biol. Int 35, N 3:221–226.
[14] Thery M., Bornens M. 2006 Cell shape and division Curr. Opin. Cell. Biol 18, N 6:648–657.
[15] Bruder S. P., Jaiswal N., Haynesworth S. E. 1997 Growth kinetics, self-renewal, and the osteogenic potential of purified human mesenchymal stem cells during extensive subcultivation and following cryopreservation J. Cell. Biochem 64, N 2;278–294.