Biopolym. Cell. 2012; 28(3):234-238 .
http://dx.doi.org/10.7124/bc.000054
Геноміка, транскриптоміка та протеоміка
Амфіфізин 1 и 2 взаємодіють з латентним мембранним білком 2А (LMP2A) вірусу Епштейна-Барр і регулюють його секрецію
1Дергай О. В., 1Дергай М. В., 1Скрипкіна І. Я., 1Циба Л. О., 1Яручик А. М., 1Риндич А. В.
  1. Державна ключова лабораторія молекулярної і клітинної біології
    Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
    вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680

Abstract

Латентний мембранний білок 2А (LMP2A) вірусу Епштейна-Барр є важливим регулятором латентної фази вірусної інфекції. Мета. Ідентифікувати білки, які взаємодіють з пролін-збагаченими мотивами LMP2A. Методи. Аналіз in silico за допомогою програмного забезпечення Scansite дозволив передбачити можливість взаємодії амфіфізину 1 (Amph1) і LMP2A. Використано загально прийняті техніки молекулярного клонування, сайт-спрямований мутагенез і тест на взаємодію in vitro для подальшого дослідження структурних основ взаємодії комплексу LMP2A/Amph1. Фракцію екзосом отримано за допомогою послідовних центрифугувань. Результати. Показано, що ізоформа LMP2A, але не LMP2А DNT взаємодіє з доменом SH3 амфіфізину 1. Виявлена взаємодія опосередковується трьома різними пролін-збагаченими мотивами, розташованими в N-кінцевій ділянці LMP2A. Всі три мотиви є взаємозамінними, оскільки присутність хоча б одного з них є достатньою для реалізації зв’язування LMP2A з Amph1. Нами продемонстровано взаємодію Amph1 і високоспорідненого з ним Amph2 з LMP2A за допомогою ко-імунопреципітації ендогенних комплексів. Мутант LMP2A за проліновими мотивами не взаємодіяв з Amph1, що спричиняло зникнення його з фракції екзосом. Висновки. Латентний мембранний білок 2А вірусу Епштейна-Барр утворює комплекси з ендоцитозними адаптерними білками Amph1 і Amph2. Ідентифіковані нові партнери LMP2A можуть впливати на його внутрішньоклітинний трафік та секрецію.
Keywords: вірус Эпштейна-Барра, LMP2A, амфіфізин, екзосоми
Повний текст: (PDF, англійською)

References

[1] Kieff E., Liebowitz D. Epstein-Barr virus and its replication Fields virology / Eds B. N. Fields, D. M. Knipe New York: Raven Press, 1990:1889–1920.
[2] Callan M. F., Tan L., Annels N., Ogg G. S., Wilson J. D., O'Callaghan C. A., Steven N., McMichael A. J., Rickinson A. B. Direct visualization of antigen-specific CD8+T cells during the primary immune response to Epstein-Barr virus in vivo J. Exp. Med 1998 187, N. 9:1395–1402.
[3] Chapman A. L., Rickinson A. B. Epstein-Barr virus in Hodgkin's disease Ann. Oncol 1998 9, Suppl. 5 S 5–16.
[4] Chen F., Hu L. F., Ernberg I., Klein G., Winberg G. Coupled transcription of Epstein-Barr virus latent membrane protein (LMP)-1 and LMP-2B genes in nasopharyngeal carcinomas J. Gen. Virol 1995 76, pt 1:131–138.
[5] Thorley-Lawson D. A. Epstein-Barr virus: exploiting the immune system Nat. Rev. Immunol 2001 1, N 1:75–82.
[6] Longnecker R., Kieff E. A second Epstein-Barr virus membrane protein (LMP2) is expressed in latent infection and colocalizes with LMP1 J. Virol 1990 64, N 5:2319–2326.
[7] Matskova L., Ernberg I., Pawson T., Winberg G. C-terminal domain of the Epstein-Barr virus LMP2A membrane protein contains a clustering signal J. Virol 2001 75, N 22:10941– 10949.
[8] Rovedo M., Longnecker R. Epstein-Barr virus latent membrane protein 2A preferentially signals through the Src family kinase Lyn J. Virol 2008 82, N 17:8520–8528.
[9] Ingham R. J., Raaijmakers J., Lim C. S., Mbamalu G., Gish G., Chen F., Matskova L., Ernberg I., Winberg G., Pawson T. The Epstein-Barr virus protein, latent membrane protein 2A, co-opts tyrosine kinases used by the T cell receptor J. Biol. Chem 2005 280, N 40:34133–34142.
[10] Merchant M., Longnecker R. LMP2A survival and developmental signals are transmitted through Btk-dependent and Btkindependent pathways Virology 2001 291, N 1:46–54.
[11] Swart R., Ruf I. K., Sample J., Longnecker R. Latent membrane protein 2A-mediated effects on the phosphatidylinositol 3-Kinase/ Akt pathway J. Virol 2000 74, N 22:10838–10845.
[12] Matskova L. V., Helmstetter C., Ingham R. J., Gish G., Lindholm C. K., Ernberg I., Pawson T., Winberg G. The Shb signalling scaffold binds to and regulates constitutive signals from the Epstein-Barr virus LMP2A membrane protein Oncogene 2007 26, N 34:4908–4917.
[13] Winberg G., Matskova L., Chen F., Plant P., Rotin D., Gish G., Ingham R., Ernberg I., Pawson T. Latent membrane protein 2A of Epstein-Barr virus binds WW domain E3 protein-ubiquitin ligases that ubiquitinate B-cell tyrosine kinases Mol. Cell. Biol 2000 20, N 22:8526–8535.
[14] Dergai M., Skrypkina I., Dergai O., Tsyba L., Novokhatska O., Filonenko V., Drobot L., Rynditch A. Identification and characterization of a novel mammalian isoform of the endocytic adaptor ITSN1 Gene 2011 485, N 2:120–129.
[15] Dergai M., Tsyba L., Dergai O., Zlatskii I., Skrypkina I., Kovalenko V., Rynditch A. Microexon-based regulation of ITSN1 and Src SH3 domains specificity relies on introduction of charged amino acids into the interaction interface Biochem. Biophys. Res. Commun 2010 399, N 2:307–312.
[16] Dergai O., Novokhatska O., Dergai M., Skrypkina I., Tsyba L., Moreau J., Rynditch A. Intersectin 1 forms complexes with SGIP1 and Reps1 in clathrin-coated pits Biochem. Biophys. Res. Commun 2010 402, N 2:408–413.
[17] Ikeda M., Longnecker R. Cholesterol is critical for Epstein-Barr virus latent membrane protein 2A trafficking and protein stability Virology 2007 360, N 2:461–468.
[18] Zarrinpar A., Bhattacharyya R. P., Lim W. A. The structure and function of proline recognition domains Sci. SRKE 2003 2003, N 179 re8.
[19] Keller S., Sanderson M. P., Stoeck A., Altevogt P. Exosomes: from biogenesis and secretion to biological function Immunol. Lett 2006 107, N 2:102–108.
[20] Yamada H., Ohashi E., Abe T., Kusumi N., Li S. A., Yoshida Y., Watanabe M., Tomizawa K., Kashiwakura Y., Kumon H., Matsui H., Takei K. Amphiphysin 1 is important for actin polymerization during phagocytosis Mol. Biol. Cell 2007 18, N 11 P. 4669–4680.
[21] Wu Y., Liang S., Oda Y., Ohmori I., Nishiki T., Takei K., Matsui H., Tomizawa K. Truncations of amphiphysin I by calpain inhibit vesicle endocytosis during neural hyperexcitation EMBO J 2007 26, N 12:2981–2990.
[22] Shang W. H., Adachi Y., Nakamura A., Copeland T., Kim S. R., Kamata T. Regulation of amphiphysin1 by mitogen-activated protein kinase: its significance in nerve growth factor receptor-mediated endocytosis J. Biol Chem 2004 279, N 39 P. 40890–40896.
[23] Peter B. J., Kent H. M., Mills I. G., Vallis Y., Butler P. J., Evans P. R., McMahon H. T. BAR domains as sensors of membrane curvature: the amphiphysin BAR structure Science 2004 303, N 5657:495–499.
[24] Lundgaard G. L., Daniels N. E., Pyndiah S., Cassimere E. K., Ahmed K. M., Rodrigue A., Kihara D., Post C. B., Sakamuro D. Identification of a novel effector domain of BIN1 for cancer suppression J. Cell. Biochem 2011 112, N 10:2992–3001.