Biopolym. Cell. 2011; 27(4):310-313.
Короткі повідомлення
Клонування та експресія гена SPAА Erysipelothrix rhusiopathiae
в Escherichia coli
- Інститут ветеринарної медицини НААН України
Вул. Донецька, 30, Київ, Україна, 03151 - Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680
Abstract
Мета. Клонувати ген SPAА – поверхневий антиген Er. rhusiopathiae – у плазмідний вектор та експресувати білок SpaА в E. coli. Методи. Розрахунок і синтез олігонуклеотидних праймерів, полімеразна ланцюгова реакція, клонування, експресія рекомбінантних білків у Е.coli, електрофорез в агарозі та поліакриламідному гелі. Результати. Повнорозмірний і усічений ген SPAА Er. rhusiopathiae клоновано в експресуючу плазміду рЕТ24а(+). Експресія повного гена не супроводжується синтезом значної кількості рекомбінантного білка, очевидно, внаслідок його токсичності для клітин E. coli. Елімінація з повнорозмірного гена фрагмента, що кодує насичену проліном ділянку, і домену тандемних повторів, а також одержання усіченого варіанта гена призводять до стабільного синтезу рекомбінантного продукту з очікуваною молекулярною масою. Висновки. Отримано рекомбінантну плазміду, яка містить фрагмент гена SPAА Er. rhusiopathiae, що дозволяє виділяти у препаративних кількостях в E. coli рекомбінантний білок з м. м. 47 кДа.
Keywords: Erysipelothrix rhusiopathiae, ген SPAА, рекомбінантний білок.
Повний текст: (PDF, російською)
References
[1]
Wood R. L., Straw S., D’Allaire W. L., Wood R. L. Erysipelas Diseases of swine. 8th ed Iowa: State University Press, Ames, 1999:419–430.
[2]
Kitajima T., Oishi E., Amimoto K., Satoshi U., Nakamura H., Oda K., Katayama S., Izumida A., Shimizu Y. Quantitative diversity of 67 kDa protective antigen among serovar 2 strains of Erysipelothrix rhusiopathiae and its implication in protective immune response J. Vet. Med. Sci 2000 62, N 10 P. 1073– 1077.
[3]
Fidalgo S. G., Riley T. V. Detection of Erysipelothrix rhusiopathiae in clinical and environmental samples Meth. Mol. Biol 2004 268: 199–205.
[4]
Ho To., Hagai S. Genetic and antigenic diversity of the surface protective antigen proteins of Erysipelothrix rhusiopathiae Clin.Vaccine Immunol 2007 14, N 7 P. 813–820.
[5]
Makino S. I., Yamamoto K., Asakura H., Shirahata T. Surface antigen, SpaA, of Erysipelothrix rhusiopathiae binds to Gram-positive bacterial cell surfaces FEMS Microbiol. Lett 2000 186, N 2:313–317.
[6]
Sawada T., Takahashi T. Cross protection of mice and swine inoculated with culture filtrate of attenuated Erysipelothrix rhusiopathiae and challenge exposed to strains of various serovars Am. J. Vet. Res 1987 48, N 2 P. 239–242.
[7]
Sato H., Miyazaki H., Sakakura H., Suzuki T., Saito H., Maehara N. Isolation and purification of a protective protein antigen of Erysipelothrix rhusiopathiae Zentralbl. Veterinarmed 1999 46, N 2:73–84.
[8]
Studier F. W. Protein production by auto-induction in high density shaking cultures Protein Expr. Purif 2005 41, N 1 P. 207– 234.
[9]
Galan J. E., Timoney J. F. Cloning and expression in Escherichia coli of a protective antigen of Erysipelothrix rhusiopathiae Infect. Immun 1990 58, N9 P. 3116–3121.
[10]
Liu M., Wang X., Yin C., Zhang Z., Lin Q., Zhen Y., Huang H. One-step on-column purification and refolding of a single-chain variable fragment (scFv) antibody against tumour necrosis factor alpha Biotechnol. Appl. Biochem. 2006. 43, Pt. 3:137-145.
[11]
Obrazhey A., Deriabin O., Tarasov O., Deryabina O. Analysis of Erysiopelothrix rhusiopathiae protein SpaA gene polymorphism Interagency thematic scientific digest «Veterinary Medicine» Kharkiv, 2007 88;161–166.
