Biopolym. Cell. 2011; 27(4):306-309.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.000110
Короткі повідомлення
Нова ізоформа адаптерного білка ITSN1 формує гомодимери за посередництвом власного С-кінцевого домену
1Дергай М. В., 1Дергай О. В., 1Циба Л. О., 1Новохацька О. В., 1Скрипкіна І. Я., 1Риндич А. В.
  1. Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
    Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680

Abstract

Раніше нами ідентифіковано нову ізоформу адаптерного білка ITSN1, названу ITSN1-22a. Вестерн-блот аналіз виявив наявність двох імунореактивних смуг 120 і 250 кДа, що відповідають ITSN1-22a. Мета цієї роботи полягала у вивченні здатності нової ізоформи формувати димери. Методи. Імунопреципітацію і Вестерн-блот аналіз використано для дослідження здатності ізоформи до димеризації. Ідентифікацію ділянки, що відповідає за формування димерів, здійснювали за допомогою сайт- спрямованого мутагенезу та делеційного аналізу. Інгібування ендоцитозу індукували дефіцитом іонів калію. Для мітогенної стимуляції клітин HEK293 застосовано епідермальний фактор росту. Результати. Нами виявлено, що надекспресована в клітинах НЕК293 ізоформа ITSN1-22a формує димери. Димеризація обумовлена специфічним для цієї ізоформи С-кінцевим доменом. Нами показано, що цистеїни С1016 і С1019 залучені до процесу гомодимеризації. Інгібування клатрин-опосередкованого ендоцитозу та стимуляція клітин мітогеном не впливають на формування димерів ізоформою ITSN1-22a. Висновки. ITSN1-22a – це єдина відома на сьогодні ізоформа ITSN1, здатна утворювати гомодимери за допомогою дисульфідних зв’язків, що може бути важливим для формування ITSN1-вмісних білкових комплексів.
Keywords: інтерсектин 1, ізоформа, гомодимер
Повний текст: (PDF, англійською)

References

[1] Sengar A. S., Wang W., Bishay J., Cohen S., Egan S. E. The EH and SH3 domain Ese proteins regulate endocytosis by linking to dynamin and Eps15 EMBO J 1999 18, N 5 P. 1159–1171.
[2] Predescu S. A., Predescu D. N., Timblin B. K., Stan R. V., Malik A. B. Intersectin regulates fission and internalization of caveolae in endothelial cells Mol. Biol. Cell 2003 14, N 12 P. 4997– 5010.
[3] Chabu C., Doe C. Q. Dap160/intersectin binds and activates aPKC to regulate cell polarity and cell cycle progression Development 2008 135, N 16 P. 2739–2746.
[4] Mohney R. P., Das M., Bivona T. G., Hanes R., Adams A. G., Philips M. R., O'Bryan J. P. Intersectin activates Ras but stimulates transcription through an independent pathway involving JNK J. Biol. Chem 2003 278, N 47 P. 47038–47045.
[5] Das M., Scappini E., Martin N. P., Wong K. A., Dunn S., Chen Y. J., Miller S. L., Domin J., O'Bryan J. P. Regulation of neuron survival through an intersectin-phosphoinositide 3'-kinase C2beta-AKT pathway Mol. Cell. Biol 2007 27, N 22 P. 7906– 7917.
[6] Hussain N. K., Yamabhai M., Ramjaun A. R., Guy A. M., Baranes D., O'Bryan J. P., Der C. J., Kay B. K., McPherson P. S. Splice variants of intersectin are components of the endocytic machinery in neurons and nonneuronal cells J. Biol. Chem 1999 274, N 22 P. 15671–15677.
[7] Tsyba L., Nikolaienko O., Dergai O., Dergai M., Novokhatska O., Skrypkina I., Rynditch A. Intersectin multidomain adaptor proteins: regulation of functional diversity Gene 2011 473, N 2 P. 67–75.
[8] Kropyvko S. V., Tsyba L. O., Skrypkina I. Ya., Rynditch A. V. Identification and functional analysis of an alternative promoter of human intersectin 1 gene Biopolym. Cell 2010 26, N 2 P. 115–120.
[9] Nikolaienko O., Skrypkina I., Tsyba L., Fedyshyn Y., Morderer D., Buchman V., de la Luna S., Drobot L., Rynditch A. Intersectin 1 forms a complex with adaptor protein Ruk/CIN85 in vivo independently of epidermal growth factor stimulation Cell Signal 2009 21, N 5 P. 753–759.
[10] Larkin J. M., Brown M. S., Goldstein J. L., Anderson R. G. Depletion of intracellular potassium arrests coated pit formation and receptor-mediated endocytosis in fibroblasts Cell 1983 33, N 1 P. 273–285.
[11] Grigorian A. L., Bustamante J. J., Hernandez P., Martinez A. O., Haro L. S. Extraordinarily stable disulfide-linked homodimer of human growth hormone Protein Sci 2005 14, N 4 P. 902–913.
[12] Yamaguchi N., Fukuda M. N. Golgi retention mechanism of beta-1,4-galactosyltransferase. Membrane-spanning domain-dependent homodimerization and association with alphaand beta-tubulins J. Biol. Chem 1995 270, N 20 P. 12170– 12176.
[13] Ichikawa T., Nakayama J., Sakura N., Hashimoto T., Fukuda M., Fukuda M. N., Taki T. Expression of N-acetyllactosamine and beta1,4-galactosyltransferase (beta4GalT-I) during adenoma-carcinoma sequence in the human colorectum J. Histochem. Cytochem 1999 47, N 12 P. 1593–602.
[14] Guipponi M., Scott H. S., Chen H., Schebesta A., Rossier C., Antonarakis S. E. Two isoforms of a human intersectin (ITSN) protein are produced by brain-specific alternative splicing in a stop codon Genomics 1998 53, N 3 P. 369–376.