Biopolym. Cell. 2010; 26(6):492-498.
Молекулярна та клітинна біотехнології
Розробка стратегії одержання рекомбінантних
одноланцюгових антитіл проти поверхневих клітинних
біомаркерів на прикладі антигену CD34 людини
- ДУ «Інститут генетичної і регенеративної медицини НАМН України»
вул. Вишгородська, 67, Київ, Україна, 04114 - Київський національний університет імені Тараса Шевченка
вул. Володимирська 64, Київ, Україна, 01601
Abstract
Антитіла проти поверхневих клітинних білків відіграють важливу роль у процедурах детектування, визначення стадії диференціації та виділення цільових популяцій клітин. Поверхневі клітинні антигени часто мають складну структуру зовнішньоклітинної ділянки молекули, яка характеризується сильним глікозилюванням та стабілізується дисульфідними зв’язками. При цьому одержання антитіл проти таких білків є нетривіальною задачею. Мета. Розробка стратегії одержання рекомбінантних антитіл проти поверхневих клітинних біомаркерів. Методи. Конструювання бібліотеки кДНК генів VH та VL імуноглобулінів тварин, імунізованих рекомбінантним антигеном, та використання біопенінгу на антиген-позитивних клітинах для збагачення вихідної бібліотеки послідовностями цільових антитіл. Детектування та відбір клонів – про дуцентів цільових антитіл здійснювали за допомогою високопродуктивних автоматизованих систем. Результати. Одержано панель з п’яти антитіл, що розпізнають антиген на поверхні клітин CD34+, методами імуноцитохімії та проточної цитометрії. Висновки. Запропоновану стратегію можна використовувати для одержання антитіл проти поверхневих клітинних антигенів.
Keywords: CD34, фаговий дисплей, рекомбінантні одноланцюгові антитіла (ScFv), біопеннінг
Повний текст: (PDF, російською)
References
[1]
Civin C. I., Strauss L. C., Brovall C., Fackler M. J., Schwartz J. F., Shaper J. H. Antigenic analysis of hematopoiesis. III. A hematopoietic progenitor cell surface antigen defined by a monoclonal antibody raised against KG-1a cells. J. Immunol. 1984; 133(1):156–165.
[2]
Berenson R. J., Andrews R. G., Bensinger W. I., Kalamasz D., Knitter G., Buckner C. D., Bernstein I. D. Antigen CD34+ marrow cells engraft lethally irradiated baboons J. Clin. Invest 1988 81, N 3:951–955.
[3]
Azzazy H. M., Highsmith W. E., Jr. Phage display technology: clinical applications and recent innovations Clin. Biochem 2002 35, N 6:425–445.
[4]
Maniatis T., Fritsch E. F., Sambrook J. Molecular cloning: a laboratory manual New York: Cold Spring Harbor Lab. publ., 1982 545 p.
[5]
Pavlova MV, Hil'chuk PV, Pokholenko IaO, Nikolaiev IuS, Kordium VA. Construction and characterization of immune combinatorial cDNA library of mouse variable immunoglobuline genes. Tsitol Genet. 2008;42(2):10-5.
[6]
Studier F. W. Protein production by auto-induction in high density shaking cultures Protein Expr. Purif 2005 41, N 1:207–234.
[7]
Gilchuk P. V., Okunev O. V., Irodov D. M., Pavlova M. V., Yakovenko O. Ya. Immobilized single chain antibodies for affinity purification of recombinant human IFN-2b Biopolym. Cell 2006 22, N 2:157–161.
[8]
Giordano R. J., Cardo-Vila M., Lahdenranta J., Pasqualini R., Arap W. Biopanning and rapid analysis of selective interactive ligands Nat. Med 2001 7, N 11:1249–1253.
[9]
Gilchuk P. V., Okunev O. V., Irodov D. M., Pavlova M. V. Overproduction of single-chain antibodies against human IFN-2b in Escherichia coli and its obtaining in biologically active form. Ukr Biokhim Zh. 2006;78(1):163–171.
[10]
Lipes B. D., Chen Y. H., Ma H., Staats H. F., Kenan D. J., Gunn M. D. An entirely cell-based system to generate singlechain antibodies against cell surface receptors J. Mol. Biol 2008 79, N 2:261–272.
[11]
Huie M. A., Cheung M. C., Muench M. O., Becerril B., Kan Y. W., Marks J. D. Antibodies to human fetal erythroid cells from a nonimmune phage antibody library Proc. Natl Acad. Sci. USA 2001 98, N 5:2682–2687.
[12]
de Bruin R., Spelt K., Mol J., Koes R., Quattrocchio F. Selection of high-affinity phage antibodies from phage display libraries Nat. Biotechnol 1999 17, N 4:397–399.
