Мета. Розширити спектр біологічно активних сполук 1,2,4-триазино[5,6-b][1,4]бензотіазинів (1,2,4-ТБТ) та виявити з-поміж них інгібітори синтезу РНК. Методи. Неемпірична квантово-хімічна оптимізація структури 3-оксо-1,2,4-ТБТ фрагментно-орієнтованим заміщенням, їхній молекулярний докінг у віртуальну мішень, раціональний хімічний синтез теоретично спрогнозованих речовин та їхнє тестування у модельній ферментативній системі транскрипції. Результати. Отримано низку похідних 1,2,4-ТБТ із замісниками у бензольному і триазиновому циклах базової молекули. Тестування сполук у системі транскрипції in vitro ДНК-залежною РНК-полімеразою бактеріофага Т7 визначило структурно- та концентраційно-залежне пригнічення ними синтезу РНК. Для всіх досліджуваних сполук експериментальні дані задовільно корелюють з результатами віртуального скринінгу. Найефективнішим інгібітором виявився 3-оксо-8-бутил-1,2,4- ТБТ, який у концентрації 6 мкг/мл забезпечує повне блокування транскрипції. Висновки. Аналіз даних тестування дозволяє припустити, що пригнічення синтезу РНК обумовлено зв’язуванням 3-оксо-8-бутил-1,2,4-ТБТ як з неасоційованою РНК-полімеразою, так і з РНК-полімеразою у складі транскрипційного комплексу.