Biopolym. Cell. 2009; 25(5):424-427.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.0007F4
Короткі повідомлення
Інтерсектин 1 та Ruk/CIN85 колокалізуються в клатрин-облямованих ямках клітин лінії MCF-7
1Ніколаєнко О. В., 1Скрипкіна І. Я., 1Циба Л. О., 2Дробот Л. Б., 1Риндич А. В.
  1. Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
    Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680
  2. Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України
    вул. Леонтовича, 9, Київ, Україна, 01601

Abstract

Активація рецепторних тирозинкіназ відповідними лігандами призводить не лише до розповсюдження сигналу, але й ініціює різні процеси, серед яких клатрин-опосередкований ендоцитоз, що регулюють клітинну відповідь. Такі процеси чітко контролюються завдяки координованій дії великої кількості білків ферментів, адапторів та інгібіторів. Прикладом адапторного білка, що функціонує як в ендоцитозі, так і в клітинній сигналізації, є інтерсектин 1 (ITSN1). У попередніх дослідженнях ми показали, що ITSN1 утворює комплекс з адапторним білком Ruk/CIN85 та убіквітинлігазою Cbl-b, які залучені до негативної регуляції рецепторних тирозинкіназ. Метою даної роботи було визначи ти субклітинну локалізацію комплексів Ruk/CIN85-ITSN1 по відношенню до клатрину та Cbl-b. Методи. Для встановлення локалізації білків клітини аденокарциноми молочної залози людини MCF-7 транзієнтно трансфікували конструкціями, що містять ITSN1 і клатрин, та вивчали методами прямого і не прямого імунофлуоресцентного аналізу. Результати. Показано, що ITSN1 і Ruk/CIN85 частковоко локалізуються з Cbl-b і клатрином у клітинах лінії MCF-7. Висновки. Продемонстровано, що комплекси Ruk/ CIN85 з ITSN1 колокалізуються з Cbl-b і знаходяться у клатрин-облямованих ямках клітин лінії MCF-7.
Keywords: інтерсектин, Ruk/CIN85, Cbl-b, клатрин-облямовані ямки, імунофлуоресценція
Повний текст: (PDF, англійською)

References

[1] Sengar A., Wang W., Bishay J., Cohen S., Egan S. The EH and SH3 domain Ese proteins regulate endocytosis by linking to dynamin and Eps15 EMBO J 1999 18, N 5:1159–1171.
[2] Predescu S., Predescu D., Knezevic I., Klein I., Malik A. Intersectin- 1s regulates the mitochondrial apoptotic pathway in endothelial cells J. Biol. Chem 2007 282, N 23 P. 17166–17178.
[3] Mohney R., Das M., Bivona T., Hanes R., Adams A., Philips M., O'Bryan J. Intersectin activates Ras but stimulates transcription through an independent pathway involving JNK J. Biol. Chem 2003 278, N 47:47038–47045.
[4] Hussain N., Jenna S., Glogauer M., Quinn C., Wasiak S., Guipponi M., Antonarakis S., Kay B., Stossel T., Lamarche- Vane N., McPherson P. Endocytic protein intersectin-l regulates actin assembly via Cdc42 and N-WASP Nat. Cell Biol 2001 3, N 10:927–932.
[5] Nikolaienko O., Skrypkina I., Tsyba L., Fedyshyn Y., Morderer D., Buchman V., de la Luna S., Drobot L., Rynditch A. Intersectin 1 forms a complex with adaptor protein Ruk/CIN85 in vivo independently of epidermal growth factor stimulation Cell. Signal 2009 21, N 5:753–759.
[6] Tong X., Hussain N., de Heuvel E., Kurakin A., Abi-Jaoude E., Quinn C., Olson M., Marais R., Baranes D., Kay B., McPherson P. The endocytic protein intersectin is a major binding partner for the Ras exchange factor mSos1 in rat brain EMBO J 2000 19, N 6:1263–1271.
[7] Nikolaienko O., Skrypkina I., Dergay O., Matskova L., Tsyba L., Dergay M., Kropyvko S., Vingberg G., Rynditch A. Cbl family proteins – new partners of intersectin 1 Collection of scientific papers «Factors of experimental evolution of organisms». Kyiv: Logos, 2006 Vil. 3:122–127.
[8] Martin N., Mohney R., Dunn S., Das M., Scappini E., O'Bryan J. Intersectin regulates epidermal growth factor receptor endocytosis, ubiquitylation, and signaling Mol. Pharmacol 2006 70, N 5:1643–1653.
[9] Hussain N., Yamabhai M., Ramjaun A., Guyi A., Baranesi D., O'Bryan J., Der C., Kay B., McPherson P. Splice variants of intersectin are components of the endocytic machinery in neurons and nonneuronal cells J. Biol. Chem 1999 274, N 22:15671–15677.
[10] Thomas S., Ritter B., Verbich D., Sanson C., Bourbonniere L., McKinney R., McPherson P. Intersectin regulates dendritic spine development and somatodendritic endocytosis but not synaptic vesicle recycling in hippocampal neurons J. Biol. Chem 2009 284, N 18:12410–12419.
[11] Havrylov S., Ichioka F., Powell K., Borthwick E., Baranska J., Maki M., Buchman V. Adaptor protein Ruk/CIN85 is associated with a subset of COPI-coated membranes of the Golgi complex Traffic 2008 9, N 5:798–812.
[12] Zhang J., Zheng X., Yang X., Liao K. CIN85 associates with endosomal membrane and binds phosphatidic acid Cell Res 2009 19, N 6:733–746.
[13] Sciaky N., Presley J., Smith C., Zaal K., Cole N., Moreira J., Terasaki M., Siggia E., Lippincott-Schwartz J. Golgi tubule traffic and the effects of brefeldin A visualized in living cells J. Cell Biol 1997 139, N 5:1137–1155.
[14] Szymkiewicz I., Kowanetz K., Soubeyran P., Dinarina A., Lipkowitz S., Dikic I. CIN85 participates in Cbl-b-mediated down-regulation of receptor tyrosine kinases J. Biol. Chem 2002 277, N 42:39666–39672.
[15] Kowanetz K., Szymkiewicz I., Haglund K., Kowanetz M., Husnjak K., Taylor J., Soubeyran P., Engstrom U., Ladbury J., Dikic I. Identification of a novel proline-arginine motif involved in CIN85-dependent clustering of Cbl and downregulation of epidermal growth factor receptors J. Biol. Chem 2003 278, N 41:39735–39746.
[16] Dikic I. CIN85/CMS family of adaptor molecules FEBS Lett 2002 529, N 1:110–115.