Biopolym. Cell. 2009; 25(3):245-249.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.0007E3
Короткі повідомлення
Одержання біфункціональних молекул, специфічних до антигену та Fc-фрагментів антитіл, методом злиття scFv-антитіл із стафілококовим білком A
1Олійник О. С., 1Кабернюк А. А., 1Редчук Т. А., 1Колибо Д. В., 1Комісаренко С. В.
  1. Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України
    вул. Леонтовича, 9, Київ, Україна, 01601

Abstract

Мета. Розробити підхід для детекції scFv та їхніх комплексів з антигенами. Методи. Сконструювано гібридні білки, які містять послідовності scFv до субодиниці В дифтерійного токсину і стафілококового білка А, та з використанням імунохімічних методів охарактеризовано отримані біфункціональні молекули. Результати. Показано, що scFv, злиті з білком А, та їхні комплекси з антигеном можна ефективно виявляти міченими імуноглобулінами довільної антигенної специфічності. Висновки. Злиття з фрагментом білка А є перспективним підходом, що дозволяє підвищити ефективність застосування scFv в імуноферментному аналізі. Отримані scFv, об’єднані із білком А, можуть бути використані при створенні тест-систем для виявлення дифтерійного токсину.
Keywords: scFv, дифтерійний токсин, біфункціональні молекули
Повний текст: (PDF, українською)

References

[1] Holliger Ph., Hudson P. J. Engineered antibody fragments and the rise of single domains Nat. Biotechnol 2005 23, N 9:1126–1136.
[2] Wang S. H., Zhang J. B., Zhang Z., P. Zhou Y. F., Yang R. F., Chen J., Guo Y. C., You F., Zhang X. E. Construction of single chain variable fragment (ScFv) and BiscFv-alkaline phosphatase fusion protein for detection of Bacillus anthracis Anal. Chem 2006 78, N 4:997–1004.
[3] Rau D., Kramer K., Hock B. Single-chain Fv antibody-alkaline phosphatase fusion proteins produced by one-step cloning as rapid detection tools for ELISA J. Immunoas. Immunochem 2002 23, N 2:129–143.
[4] Aubrey N., Devaux C., di Luccio E., Goyffon M., Rochat H., Billiald P. A recombinant scFv/streptavidin-binding peptide fusion protein for the quantitative determination of the scorpion venom neurotoxin AahI Biol. Chem 2001 382, N 11:1621–1628.
[5] Kipriyanov S. M., Breitling F., Little M., Dubel S. Singlechain antibody streptavidin fusions: tetrameric bifunctional scFv-complexes with biotin binding activity and enhanced affinity to antigen Hum. Antibodies Hybridomas 1995 6, N 3:93–101.
[6] Braren I., Greunke K., Umland O., Deckers S., Bredehorst R., Spillner E. Comparative expression of different antibody formats in mammalian cells and Pichia pastoris Biotechnol. Appl. Biochem 2007 47, N 4:205–214.
[7] Cao M., Cao P., Yan H., Ren F., Lu W., Hu Y., Zhang S. Construction and characterization of an enhanced GFP-tagged anti-BAFF scFv antibody Appl. Microbiol. Biotechnol 2008 79, N 3:423–431.
[8] Hobera S., Nordb K., Linhultc M. Protein A chromatography for antibody purification J. Chromatogr. B 2007 848, N 1:40–47.
[9] Tai M. S., Mudgett-Hunter M., Levinson D., Wu G. M., Haber E., Oppermann H., Huston J. S. A bifunctional fusion protein containing Fc-binding fragment B of staphylococcal protein A amino terminal to antidigoxin single-chain Fv Biochemistry 1990 29, N 35:8024–8030.
[10] Gandecha A., Owen M. R., Cockburn W., Whitelam G. C. Antigen detection using recombinant, bifunctional single-chain Fv fusion proteins synthesised in Escherichia coli Protein Exp. Purif 1994 5, N 4:385–390.
[11] Sambrook J., Fritsch E. F. Molecular cloning: A laboratory manual New York: Cold Spring Harbor Lab., 2001 999 p.
[12] Oliinyk O. S., Kaberniuk A. A., Redchuk T. A., Korotkevich N. V., Labyntsev A. U., Romanyuk S. I., Kolibo D. V., Komisarenko S. V. Construction of immune library of murine immunoglobulin genes and screening of single chaine Fv-antibodies to diphtheria toxin B subunit. Ukr. Biokhim. Zh. 2009; 81(2):68–79.
[13] Schagger H., von Jagow G. Tricine-sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa Anal. Biochem 1987 166:368–379.
[14] Kabernyuk AA, Oliinyk OS, Redchuk TA, Romanyuk SI, Kolibo DV, Komisarenko SV. The cloning of genes of diphtheria toxin's recombinant subunits of Corynebacterium diphtheriae and their expression in Esherichia coli cells. Dopovidi Nats Akad Nauk Ukrainy. 2008; (3):160-6.
[15] Inouye S., Sahara Y. Soluble protein expression in E. coli cells using IgG-binding domain of protein A as a solubilizing partner in the cold induced system Biochem. and Biophys. Res. Communs 2008 376, N 3:448–453.
[16] Verdoliva A., Pannone F., Rossi M., Catello S., Manfredi V. Affinity purification of polyclonal antibodies using a new allD synthetic peptide ligand: comparison with protein A and protein G J. Immunol. Meth 2002 271, N 1–2:77–88.