Biopolym. Cell. 2005; 21(6):525-530.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.000710
Молекулярна та клітинна біотехнології
Конструювання штамів — надпродуцентів формальдегіддегідрогенази метилотрофних дріжджів Hansenula polymorpha
1Демків О. М., 1Парижак С. Я., 1Красовська О. С., 1Стасик О. В., 1Гайда Г. З., 1Сибірний А. А., 1Гончар М. В.
  1. Інститут біології клітини НАН України
    вул. Драгоманова, 14/16, Львів, Україна, 79005

Abstract

Для генно-інженерного конструювання надпродуцента глутатіонзалежної формальдегіддегідро­генази (ФдДГ) обрано термотолерантні метилотрофні дріжджі Н. polymorpha NCYC 495 (leul-l). Ген FLD1 з власним промотором введено у плазміду інтегративного типу pYTl, яка містила ген LEU2 Saccharomyces cerevisiae, з подальшим включенням цього гена у геном штаму-реципіента leul-I. Здійснено селекцію інтегративних трансформантів за ознаками прототрофності по лейцину та резистентності до підвищених концентрацій формальдегіду (до 15 мМ) у ростовому середовищі. Визначено оптимальні умови культивування штамів для досягнення максимального рівня синтезу ФдДГ. Відібрано кращий трансформант як перспективний продуцент ФдДГ з активністю до 4 мкмоль·хв–1· мг–1 білка у безклітинному екстракті.
Keywords: глутатіонзалежна формальдегіддегідрогеназа, метилотрофні дріжджі Hansenula polymorpha, генно-інженерне конструювання
Повний текст: (PDF, українською)

References

[1] Hansen H, Hollenberg CP. Hansenula polymorpha (Pichia angusta). In: Nonconventional Yeasts in Biotechnology . Springer 1996;293–311.
[2] Aggelis G, Margariti N, Kralli C, Flouri F. Growth of Candida boidinii on methanol and the activity of methanol-degrading enzymes as affected from formaldehyde and methylformate. J Biotechnol. 2000;80(2):119-25.
[3] Formaldehyde. In: Environmental Health Criteria 89. Geneva: World Health Organization, 1989. (Polish Transl: Formaldehyd. Kryteria zdrowne srodowiska. T. 89. Jydu: Instytut Medycyny Pracy, 1993 1-191.
[4] Szende B, Tyih?k E, Sz?k?n G, K?tay G. Possible Role of Formaldehyde in the Apoptotic and Mitotic Effect of 1-Methyl-Ascorbigen. Pathol Oncol Res. 1995;1(1):38-42.
[5] Tyihak E, Trezl L, Szende B. Formaldehyde Cycle and the Phases of Stress Syndrome. Ann NY Acad Sci.; 1998;851:259-70.
[6] Gonchar MV. [Alternative mechanisms of detoxication of formaldehyde, formate, and hydrogen peroxide in methylotrophic yeasts]. Mikrobiol Z. 2000;62(1):30-9.
[7] Maidan NN, Gonchar MV, Sibirny AA. Oxidation of exogenous formaldehyde in methylotrophic and nonmethylotrophic yeast cells. Biochemistry (Mosc). 1997;62(6):636-40.
[8] Feron VJ, Til HP, de Vrijer F, Woutersen RA, Cassee FR, van Bladeren PJ. Aldehydes: occurrence, carcinogenic potential, mechanism of action and risk assessment. Mutat Res. 1991;259(3-4):363-85.
[9] Yu PH. Deamination of methylamine and angiopathy; toxicity of formaldehyde, oxidative stress and relevance to protein glycoxidation in diabetes. J Neural Transm Suppl. 1998;52:201-16.
[10] Stasyk OV, Ksheminskaya GP, Kulachkovskii AR, Sibirnyi AA. Mutants of the methylotrophic yeast Hansenula polymorpha with impaired catabolite repression. Mikrobiologiia. 1997; 66(6):755-60.
[11] Shen S, Sulter G, Jeffries TW, Cregg JM. A strong nitrogen source-regulated promoter for controlled expression of foreign genes in the yeast Pichia pastoris. Gene. 1998;216(1):93-102.
[12] Baerends RJ, Sulter GJ, Jeffries TW, Cregg JM, Veenhuis M. Molecular characterization of the Hansenula polymorpha FLD1 gene encoding formaldehyde dehydrogenase. Yeast. 2002;19(1):37-42.
[13] Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T. Molecular cloning: A laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor Lab. press, 1989. 452 p.
[14] Faber KN, Haima P, Harder W, Veenhuis M, AB G. Highly-efficient electrotransformation of the yeast Hansenula polymorpha. Curr Genet. 1994;25(4):305-10.