Biopolym. Cell. 2003; 19(2):179-184.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.00064B
Молекулярна та клітинна біотехнології
Біосинтез основного фактора росту фібробластів людини в клітинах Escherichia coli та його очищення
1Славченко І. Ю., 1Борейко О. В., 1Гавриш Т. Г., 1Костюченко І. П., 1Кордюм В. А.
  1. ВНДК «Біотехнолог»
    вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680

Abstract

Основний фактор росту фібробластів (bFGF, відомий також як FGF-2) є важливим модулятором клітинної диференціації, проліферації, міграції, ангіогенезу та ін. у клітинах різного типу. Рекомбінантний bFGF людини розглядається як по­тенційний засіб для лікування судинних і деяких інших захво­рювань. У представленій роботі розроблено систему біосин­тезу bFGF людини (146 амінокислотних залишків) у клітинах Е. coli і його очищення. Метод отримання рекомбінантного білка передбачає інфікування фагом лямбда клітин BL21 (DE3), які несуть плазміду з цільовим геном під контролем промотору фага Т7. Цей процесе закінчується лізисом клітин штаму-продуцента і синтезований bFGF вивільняється в культуральне середовище, де накопичується в розчинній формі (біля 60 мг/л). Цільовий білок очищували, використовуючи афінну хроматографію на гепарин-сефарозі, до гомогенності не менше 98 %. У біологічних тестах показано, що отриманий bFGF стимулює ангіогенез у хоріоалантоїдній мебрані курячих ембріонів.
Повний текст: (PDF, російською)

References

[1] Nugent MA, Iozzo RV. Fibroblast growth factor-2. Int J Biochem Cell Biol. 2000;32(2):115-20.
[2] Dow JK, deVere White RW. Fibroblast growth factor 2: its structure and property, paracrine function, tumor angiogenesis, and prostate-related mitogenic and oncogenic functions. Urology. 2000;55(6):800-6.
[3] Powers CJ, McLeskey SW, Wellstein A. Fibroblast growth factors, their receptors and signaling. Endocr Relat Cancer. 2000;7(3):165-97.
[4] Mergia A, Eddy R, Abraham JA, Fiddes JC, Shows TB. The genes for basic and acidic fibroblast growth factors are on different human chromosomes. Biochem Biophys Res Commun. 1986;138(2):644-51.
[5] Touriol C, Morillon A, Gensac MC, Prats H, Prats AC. Expression of human fibroblast growth factor 2 mRNA is post-transcriptionally controlled by a unique destabilizing element present in the 3'-untranslated region between alternative polyadenylation sites. J Biol Chem. 1999;274(30):21402-8.
[6] Gospodarowicz D, Neufeld G, Schweigerer L. Fibroblast growth factor: structural and biological properties. J Cell Physiol Suppl. 1987;Suppl 5:15-26.
[7] B?hlen P, Baird A, Esch F, Ling N, Gospodarowicz D. Isolation and partial molecular characterization of pituitary fibroblast growth factor. Proc Natl Acad Sci U S A. 1984;81(17):5364-8.
[8] Abraham JA, Whang JL, Tumolo A, Mergia A, Friedman J, Gospodarowicz D, Fiddes JC. Human basic fibroblast growth factor: nucleotide sequence and genomic organization. EMBO J. 1986;5(10):2523-8.
[9] Laham RJ, Garcia L, Baim DS, Post M, Simons M. Therapeutic Angiogenesis Using Basic Fibroblast Growth Factor and Vascular Endothelial Growth Factor Using Various Delivery Strategies. Curr Interv Cardiol Rep. 1999;1(3):228-233.
[10] Ford-Perriss M, Abud H, Murphy M. Fibroblast growth factors in the developing central nervous system. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2001;28(7):493-503.
[11] Nakamura K, Kurokawa T, Aoyama I, Hanada K, Tamura M, Kawaguchi H. Stimulation of bone formation by intraosseous injection of basic fibroblast growth factor in ovariectomised rats. Int Orthop. 1998;22(1):49-54.
[12] Slavchenko I. Yu. Isolation of clones sensitive to bacteriophage ? from the phage resistant Escherichia coli strain. Biopolym Cell. 2001; 17(2):160-5.
[13] Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970;227(5259):680-5.
[14] Studier FW, Moffatt BA. Use of bacteriophage T7 RNA polymerase to direct selective high-level expression of cloned genes. J Mol Biol. 1986;189(1):113-30.
[15] Studier FW, Rosenberg AH, Dunn JJ, Dubendorff JW. Use of T7 RNA polymerase to direct expression of cloned genes. Methods Enzymol. 1990;185:60-89.
[16] Iwane M, Kurokawa T, Sasada R, Seno M, Nakagawa S, Igarashi K. Expression of cDNA encoding human basic fibroblast growth factor in E. coli. Biochem Biophys Res Commun. 1987;146(2):470-7.
[17] Fox GM, Schiffer SG, Rohde MF, Tsai LB, Banks AR, Arakawa T. Production, biological activity, and structure of recombinant basic fibroblast growth factor and an analog with cysteine replaced by serine. J Biol Chem. 1988;263(34):18452-8.
[18] Squires CH, Childs J, Eisenberg SP, Polverini PJ, Sommer A. Production and characterization of human basic fibroblast growth factor from Escherichia coli. J Biol Chem. 1988;263(31):16297-302.
[19] Knoerzer W, Binder HP, Schneider K, Gruss P, McCarthy JE, Risau W. Expression of synthetic genes encoding bovine and human basic fibroblast growth factors (bFGFs) in Escherichia coli. Gene. 1989;75(1):21-30.
[20] Ke Y, Wilkinson MC, Fernig DG, Smith JA, Rudland PS, Barraclough R. A rapid procedure for production of human basic fibroblast growth factor in Escherichia coli cells. Biochim Biophys Acta. 1992;1131(3):307-10.
[21] Slavchenko IYu. The influence of temperature on the yield soluble human alpha interferon in the system of recombinant proteins overproduction using bacteriophage lambda. Biopolym Cell. 2002; 18(5):436-441.