М\\який та ефективний метод пермеабілізації клітин тварин і людини

Негруцький, Б. С.

doi:10.7124/bc.00046A

Biopolym. Cell. 1997; 13(1):70-74.

http://dx.doi.org/10.7124/bc.00046A

Клітинна біологія

М\який та ефективний метод пермеабілізації клітин тварин і людини

1Негруцький Б. С.

Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680

Abstract

Одним з найперспективніиіих методів вивчення відкритої недавно субклітинної організації ряду метаболічних процесів і механізмів їх протікання у вищих еукаріотах є використання пермеабілізованних клітин. Існуючі методи пермеабілізації пропонують доволі жорстку обробку мембран, що призводить до втрати інтегральності вмісту клітин. У цій роботі для пермеабілізації клітин тварин і людини використано детергент м'якої дії – рослинний глікозид сапонін. Ця речовина виявилася практично єдиною із тестованих, використання якої дозволило забезпечити, з одного боку, значне збереження внутрішньоклітинної організації і, з другого, – доступ екзогенних макромолекул всередину клітин. Розроблено м'які умови перфорації цитоплазматичних мембран, які різняться для прикріплених до поверхні і перебуваючих у суспензії клітин. Показано високу функціональну активність пермеабілізованих клітин та доступність інтер'єру клітин флюоресцентно міченим білкам.

Повний текст: (PDF, російською)

References

[1] Srere PA. Complexes of sequential metabolic enzymes. Annu Rev Biochem. 1987;56:89-124.

[2] Spivey HO, Merz JM. Metabolic compartmentation. Bioessays. 1989;10(4):127-30.

[3] Negrutskii BS, Deutscher MP. Channeling of aminoacyl-tRNA for protein synthesis in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A. 1991;88(11):4991-5.

[4] Heppel LA, Makan N. Methods for rapidly altering the permeability of mammalian cells. J Supramol Struct. 1977;6(3):399-409.

[5] Ryazanov AG, Ovchinnikov LP, Spirin AS. Development of structural organization of protein-synthesizing machinery from prokaryotes to eukaryotes. Biosystems. 1987;20(3):275-88.

[6] Melan MA, Sluder G. Redistribution and differential extraction of soluble proteins in permeabilized cultured cells. Implications for immunofluorescence microscopy. J Cell Sci. 1992;101 ( Pt 4):731-43.

[7] Newmeyer DD, Finlay DR, Forbes DJ. In vitro transport of a fluorescent nuclear protein and exclusion of non-nuclear proteins. J Cell Biol. 1986;103(6 Pt 1):2091-102.

[8] Jacob MC, Favre M, Bensa JC. Membrane cell permeabilization with saponin and multiparametric analysis by flow cytometry. Cytometry. 1991;12(6):550-8.

[9] Bangham AD, Horne RW, Glauert AM, Dingle JT, Lucy JA. Action of saponin on biological cell membranes. Nature. 1962;196:952-5.

[10] Wassler M, Jonasson I, Persson R, Fries E. Differential permeabilization of membranes by saponin treatment of isolated rat hepatocytes. Release of secretory proteins. Biochem J. 1987;247(2):407-15.

[11] Lin A, Krockmalnic G, Penman S. Imaging cytoskeleton--mitochondrial membrane attachments by embedment-free electron microscopy of saponin-extracted cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 1990;87(21):8565-9.

[12] Voelker DR. Characterization of phosphatidylserine synthesis and translocation in permeabilized animal cells. J Biol Chem. 1990;265(24):14340-6.

[13] Burgess GM, McKinney JS, Fabiato A, Leslie BA, Putney JW Jr. Calcium pools in saponin-permeabilized guinea pig hepatocytes. J Biol Chem. 1983;258(24):15336-45.