Biopolym. Cell. 1996; 12(3):27-33.
http://dx.doi.org/10.7124/bc.000429
Протеолітичний біосенсор на основі рН-чутливих польових транзисторів. 1. Вивчення порівняльних характеристик нативного і іммобілізованого трипсину для створення ензимобіосенсора
1Бєлоіван О. А., 1Солдаткін О. П., 2Стародуб М. Ф., 1Єльська Г. В.
  1. Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
    Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680
  2. Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України
    вул. Леонтовича, 9, Київ, Україна, 01601

Abstract

Проаналізовано методи іммобілізації трипсину з точки зору сенсорної технології. Здійснено іммобілізацію трипсину на напівпровідникову поверхню шляхом поперечної зшивки у білковій мембрані в парах глутарового альдегіду (ТА). Підібрано оптимальні умови цього процесу: співвідношення трипсин: БСА – 1:4; час інкубації в парах ГА 2 год при кімнатній температурі. Вивчено вплив стабілізуючих додатків гліцерину і сахарози на характеристики мембрани. Додавання 2,0–2,5 % гліцерину підвищує активність мембран і рівень адгезії до поверхні. Проведено порівняльне дослідження каталітичних характеристик вільного і іммобілізованого трипсину, таких як Км, залежність активності ферменту від рН, буферної ємності та іонної сили аналізованого розчину. Результати обговорюються з позиції можливого використання отриманих мембран як чутливого елемента протеолітичного біосенсора.
Повний текст: (PDF, російською)

References

[1] Darbre A. Practical protein chemistry. Jone Wiley and Sons 1986, 141 p.
[2] Dixon M, Webb EC. Enzymes. 3nd ed. New York, Acad. Press, 1979; 1116 p.
[3] Tarasevich MR, Bogdanovskaya VA. Modified electrodes and sensors based on them. Zh vsesoyuzhnogo khim obschestva im D I Mendeleeva. 1989;34(3):349.
[4] Immobilized enzymes. Ed. K. Mosbach. Methods Enzymol. 1976; 44:661—663.
[5] Fu H, Anzai J, Osa T, Matsuo T. Proteolytic enzyme sensors using an ion-sensitive field effect transistor. Chem Pharm Bull (Tokyo). 1988;36(3):1190-3.
[6] Immobilised cells and enzymes — A practical approach: Edited by J Woodward. IRL Press, Oxford. 1985. 177 p.
[7] Soldatkin AP, Boubryak OA, Starodub NF, El’skaya AV, Sandrovsky AK, Shul’ga AA, Strikha VI. Urease biosensor based on field effect transistor. Design features and performance in a model conditions. Electrochemistry (Moskow). 1993; 29(3):315-9.
[8] Soldatkin AP, El’skaya AV, Shul’ga AA, Netchiporouk LI, Nyamsi Hendji AM, Jaffrezic-Renault N, et al. Glucose-sensitive field-effect transistor with additional Nafion membrane. Anal Chim Acta. 1993;283(2):695–701.
[9] Kimura J, Kawana Y, Kuriyama T. An immobilized enzyme membrane fabrication method using an ink jet nozzle. Biosensors. 1989;4(1):41–52.
[10] Starodub NF, Khustochka LN, Lazarenko AV, Boubryak OA, Terent’ev AG, El’skaya AV. Integration of the biological material in the electrochemical biosensor device. Zh Anal Khim. 1990; 45(7):1433-40
[11] Dawson RMC, Elliott DC, Elliot WH, Jones KM. Data for Biochemical research. Clarendon Press Oxford 1986.
[12] Goronovsky IT, Nazarenko YuP, Nekryach EF. Short handbook of chemistry. Kiev: Naukova dumka, 1965; 835 p.