Biopolym. Cell. 2024; 40(4):314-318.
Короткі повідомлення
Модифікований метод аналізу поліморфізму I/D гена АСЕ1 з використанням температурних кривих плавлення продуктів ПЛР
1Лівшиць Л. А., 1Городна О. В., 2Дзьобак А. В., 2Могилевець А. М., 1Лівшиць Г. Б., 3Антипкін Ю. Г., 4Красненков Д. С.
  1. Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
    Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03143
  2. Київський національний університет імені Тараса Шевченка
    вул. Володимирська, 64, Київ, Україна, 01601
  3. Всеукраїнський центр материнства та дитинства, НАМН України
    вул. Платона Майбороди, 8, Київ, Україна, 04050
  4. Інститут геронтології імені Д. Ф. Чеботарова НАМН України
    Вул. Вишгородська, 67, Київ, Україна, 04114,

Abstract

Мета. Ген ACE1 є ключовим у роботі ренін–ангіотензинової системі, оскільки він кодує фермент ACE1, який регулює артеріальний тиск та водно–електролітний баланс. Поліморфізм I/D гена ACE1 зумовлює різний рівень синтезу фермента і є асоційованим із різними патологічними станами, включаючи перебіг COVID–19. Метою нашого дослідження було розробити ефективний метод для аналізу індел–поліморфізму гена ACE1 за допомогою аналізу температурних кривих плавлення специфічних продуктів ПЛР. Методи. Генотипування здійснювали методом ПЛР з використанням ДНК, виділеної з лейкоцитів периферійної крові. Праймери розробили за допомогою BLAST SEARCH та синтезували у компанії METABION (Німеччина). Реакцію проводили з використанням суміші “HOT FIREPol EvaGreen qPCR Mix Plus”. Ампліфікацію виконували на iQ5TM Multicolor Real–Time PCR Detection System (BIO–RAD), аналізували криві плавлення за допомогою BIO–RAD iQ5 Optical System Software V 2.0. Результати. Запропонований метод, із використанням однієї пари праймерів, виявився ефективним для детекції генотипів на основі кривих температури плавлення продуктів ПЛР: пік при 83–85°C відповідав делеції, при 86–89°C — інсерції, а за наявності обох піків генотип визначали як гетерозиготний. Висновки. Запропонований метод генотипування I/D–поліморфізму гена ACE1 є простим і надійним, може бути використаний для аналізу генетичних маркерів серцево–судинної патології та прогнозу перебігу COVID–19.
Keywords: АСЕ1, InDel, аналіз кривих температури плавлення

References

[1] "Physiology, Renin-Angiotensin System." John H. Fountain., Jasleen Kaur., Sarah L. Lappin 2023.
[2] Zheng H, Cao JJ. Angiotensin-Converting Enzyme Gene Polymorphism and Severe Lung Injury in Patients with Coronavirus Disease 2019. Am J Pathol. 2020; 190(10):2013-7.
[3] Rigat B, Hubert C, Alhenc-Gelas F, Cambien F, Corvol P, Soubrier F. An insertion/deletion polymorphism in the angiotensin I-converting enzyme gene accounting for half the variance of serum enzyme levels. J Clin Invest. 1990; 86(4):1343-6.
[4] Stroke genetics. Pankaj Sharma, James F. Meschia : Springer-Verlag London Ltd. 2013. 320p 10.1007/978-0-85729-209-4 ISBN (Print)0857292080, 9780857292087
[5] Nissen PH, Campbell NB, Højskov CS, Fløe A, Hoffmann HJ, Hilberg O, Ladefoged SA, Møller HJ. Development of a high-resolution melting genotyping assay for the angiotensin I converting enzyme insertion/deletion polymorphism and establishment of genotype-specific reference intervals in a Danish population. Ann Clin Biochem. 2015; 52(Pt 1):105-12.
[6] Chen KY, Xu JX, Wang MM, Hu D, Xie F, Huang D, Chen J, Yang T, Zhang J, Song F, Huang S, Zhong T. Single probe PCR melting curve analysis MTHFR C677T SNP sites. Anal Biochem. 2021; 619:114102.
[7] Zobel CM, Kuhn H, Schreiner M, Wenzel W, Wendtland J, Goekeri C, Scheit L, Oltmanns K, Rauschning D, Grossegesse M, Hofmann N, Wirtz H, Spethmann S. Impact of ACE I gene insertion/deletion, A-240T polymorphisms and the renin-angiotensin-aldosterone system on COVID-19 disease. Virol J. 2024; 21(1):15.
[8] Harashchenko TA, Umanets TR, Mohylevets AO, Gorodna OV, Krasnenkov DS, Antypkin YuH, Livshyts LA. Association of rs4646994 polymorphism of the ACE1 gene with the severity of COVID-19 in children from Ukraine. Cytol Genet. 2025. In press.