Biopolym. Cell. 2021; 37(6):428-437.
Структура та функції біополімерів
Виділення та очистка рекомбінантного інтерлейкіну-7 людини
1, 2Луценко Т. М., 1Мотроненко В. В.
  1. Національний технічний університет України "Київський політехнічний інститут імені Ігоря Сікорського"
    пр-т Перемоги, 37, Київ, Україна, 03056
  2. “PRO-PHARMA”
    Козацька вул., 120/4корп Ж, буд. Київ, Україна, 03022
Мета. Розробити метод виділення та очищення рекомбінантного інтерлейкіну-7 людини з бактерійних тілець включення. Методи. Cинтез білка шляхом ферментації, денситометрирування, ренатурація методом гель-фільтрації, двоетапна хроматографічна очистка білка. Результати. Отримані шляхом ферментації в клітинах E.coli тільця-включення, що містять рекомбінантний інтерлейкін-7 людини солюбілізували в буфері наступного складу: 7М гуанідин гідрохлорид, 100мМ Тріс-НСl, 0,1 % Tвін-20 та 50мМ дітіотріетолу протягом 1 год при температурі 22ºС. Ренатурацію проводили заміною буферу на колонці XK26/40 (GE Healthcare) із Sephadex G-25 fine врівноваженій розчином Кларка-Лабса, який містив L-аргінін гідрохлорид та твін-20. Наступну стадію очищення рІЛ-7 проводили у два етапи: на першому етапі для проведення очистки рІЛ-7 в колонку упаковували 20 мл Q сефарози. Фракцію рІЛ-7, очищену на Q сефарозі очищали на SP сефарозі. Елюцію рІЛ-7 проводили двохступінчастим градієнтом NaCl (0,2 і 0,7 М) в буфері 0,05 М KH2PO4/NaOH pH 6,0; 0,1 М L-аргініну, 0,1 % Твін-80. Висновки. Вихід цільового білка після всіх запропонованих етапів очистки становив 10 %, чистота близько 95 %, що дозволяє його використання для подальшої розробки різноманітних фармацевтичних форм.
Keywords: інтерлейкін-7, тільця-включення, рефолдинг, гель-фільтрація, ренатурація.