Biopolym. Cell. 2006; 22(3):192-200.
Структура та функції біополімерів
Дослідження структурно-функціональних взаємодій поліедрину вірусу ядерного поліедрозу тутового шовкопряда (Bombyx mori) з протеазою та PHK поліедрів. Вплив протеази на дисоціацію поліедрину у процесі гель-фільтрації через сефарозу 6B
1Козлов Е. А., 1Ніязова Н., 1Бобровська М. Т., 1Ширіна Т. В.
  1. Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
    Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680

Abstract

Відомо, що поліедри ВЯП В. mori містять протеазу, яка при розчиненні поліедрів in vitro (рН 10,5) розщеплює поліпептидний ланцюг поліедрину (молекулярна маса (м. м.) 28500) до фрагментів з м. м. 25000, 22000, 19000, 10000 і 8000, що перекриваються. Крім цього, поліедрин у розчині з рН 10,5 існує у вигляді високомолекулярних 13S- (70 %) та > 13S- (30 %) асоціатів. Показано, що в процесі гель-фільтрації при рН 10,5 через сефарозу 6В розчину поліедрину з рН 10,5 високомолекулярні асоціати частково дисоціюють до невідомих раніше 8,58-асоціатів, поліпептиду з м. м. 25000 та його димеру з коефіцієнтом седиментації 3,4S. Причому недисоційовані високомолекулярні асоціати та 8,58-асоціат мають лише повний поліпептидний ланцюг з м. м. 28500. При гель-фільтрацїі за рН 11,0 розчинів з тим же значенням рН високомолекулярні асоціати повністю дисоціюють до 8,58-асоціатів, поліпептиду з м. м. 22000 та його димеру з коефіцієнтом седиментації 3,2S. 8,58-асоціат також містить лише повний поліпептид­ний ланцюг. РНК при гель-фільтрацїі в обох випадках вияв­ляється в у високомолекулярній (13S та більше) та низькомолекулярній (м. м. < 25000) зонах. 8,58-асоціат РНК не має. Після попереднього прогрівання поліедрів при 80—90 °С проте­аза не розщеплює поліедрину в розчині з рН 10,5. При гель- фільтрацїі за рН 10,5 дисоціація високомолекулярних асоціатів до 8,5S-асоціатів з повним поліпептидним ланцюгом значно менша, але при цьому відокремлюється малий РНП-комплекс з м. м. 20000—25000 і коефіцієнтом седиментації 2,9 S, що містить поліпептид з м. м. 10000—12000. Обговорюється вплив протеази та РНК на дисоціацію поліедрину та ви­вільнення віріонів з поліедрів in vivo.
Keywords: вірус ядерного поліедрозу, поліедрин, асо­ціація—дисоціація, протеаза поліедрів, РНК поліедрів, РНП- комплекс

References

[1] Zhimerikin VN. Some properties of the virus strain Birdia diprionis "Tomsk". Insect viruses Eds. NN Vorob'ev, LM Tarasevich. M.: Nauka, 1975; 197 p.
[2] Kozlov EA, Soguliaeva VM, Levitina TL, Vereshchak V, Serebriany? SV. [Purification of the polyhedral protein of nuclear polyhedrosis virus of mulberry silkworm and association of the protein in solution]. Biokhimiia. 1969;34(4):679-85.
[3] Kozlov EA, Unguryanu N, Serebryanyy SB. The possible role of proteases in virions nuclear polyhedrosis virus of the silkworm. Viral diseases of plants and insects: Tr LSHA. Elgava, 1980; 121:45-8.
[4] Bobrovskaya MT, Kovalev VA, Shirina TV, Rudenko AV, Kozlov EA. Dynamics of cleavage of the Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus polyhedrin by polyhedral protease and identification of cleaved bonds. Biopolym Cell. 2004; 20(3):207-14.
[5] Weber K, Osborn M. The reliability of molecular weight determinations by dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. J Biol Chem. 1969;244(16):4406-12.
[6] Bowen TJ. An introduction to ultracentrifugation. Wiley-Interscience, New York, 1971. 171 p.
[7] Maibaum WW. Determination of pentoses in nucleotides by the Bial reaction. Biokhimiia. 1945;10(4):353-9.
[8] Bergold GH. Die isolierung des poliedervirus und die natur der polieder. Z. Naturforsch. 1947; 2b:122-43.
[9] Kozlov EA, Levitina TL, Gusak NM. The primary structure of baculovirus inclusion body proteins. Evolution and structure-function aspects. Curr Top Microbiol Immunol. 1986;131:135-64.
[10] Harrap KA. The structure of nuclear polyhedrosis viruses. I. The inclusion body. Virology. 1972;50(1):114–23.
[11] Lylo VV, Serebryani SB. Hydrodynamic characteristics of the 12S-oligomer of the protein of inclusion bodies of a nuclear polyhedrosis virus of the silkworm (Bombyx mori). Biopolym Cell. 1988; 4(3):139-144, 150.
[12] Payne CC, Kalmakoff J. Alkaline protease associated with virus particles of a nuclear polyhedrosis virus: assay, purification, and properties. J Virol. 1978;26(1):84-92.
[13] Kozlov EA, Serebriany? SB. [Degradation of silkworm nuclear polyhedrosis virus]. Mikrobiol Zh. 1980;42(3):365-71.