Biopolym. Cell. 2003; 19(4):367-373.
Молекулярна та клітинна біотехнології
Суперсинтез альфа-2b інтерферону людини у клітинах Escherichia coli в розчинній формі з використанням системи експресії на основі PHK-полімерази фага Т7
1Славченко І. Ю., 1Борейко О. В., 1Воробей Н. В., 1Черних С. І., 1Кордюм В. А.
  1. ВНДК «Біотехнолог»
    вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680
Розроблено ефективну технологію одержання розчинного альфа-2b інтерферону людини (ІФН) з використанням системи експресії на основі PHK-полімерази фага Т7. Синтезований для цього штучний ген ІФН клонували в експресійний вектор рЕТ-24а, який містить Т7 промотор и термінатор. Рекомбінантну плазміду, позначену як рЕТ-αIФН, трансформу­ вали в клітини Е. coli BL (DE3) і синтез ІФН індукували ізопропіл-β-D-тіогалактозидом. Вивчали вплив температури (37 и 21 °С) культивування клітин Е. coli BL (рЕТ-αIФН) на рівень синтезу і вихід розчинного ІФН. Встановлено, що рівень синтезу рекомбінантного білка у перші години після індукції при температурі 37 °С вищий, ніж при 21 °С. Так, через 4 год після індукції вихід ІФН при культивуванні продуцента при 37 °С складає до 20 %, а при 21 °С – лише 7 % від сумарних білків клітини. Однак якщо ІФН експресується при темпера­турі 37 °С, то він накопичується в клітинах у вигляді нерозчинних тілець включень. Показано, що зниження темпе­ратури культивування продуцента після індукції сприяє нако­пиченню цільового білка в розчинній формі. Збільшення трива­лості культивування продуцента при температурі 21 °С до 18 год дозволяє одержувати розчинний ІФН у більшій кіль­кості. Розроблена нами технологія отримання ІФН передба­чає інфікування фагом лямбда клітин Е. coli BL21 (DE3), які містять плазміду з цільовим геном під контролем промотора фага Т7. В результаті лізису клітин штамма-продуцента синтезований цільовий білок вивільняється у середовище для росту, де й накопичується у розчинній формі. За оптимальних умов культивування 1 л фаголізату містить біля 200 мг розчинного ІФН. Отриманий вихід ІФН більш ніж у 2,5 разу вищий порівняно з раніше досягнутим нами виходом розчинно­го ІФН при використанні як продуцента клітин Е. coli SG30 (pIF-16), що несуть плазміду з двома копіями штучного гена ІФН під контролем тандема триптофанових промоторів.