Biopolym. Cell. 2001; 17(3):216-220.
Структура та функції біополімерів
Лейцил-тРНК синтетаза із Thermus thermophilus. Очищення і деякі властивості кристалів ферменту
1Яремчук Г. Д., 1Гудзера О. І., 1Єгорова С. П., 1Рожко Д. І., 1Крикливий І. А., 1Тукало М. А.
  1. Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
    Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680

Abstract

Лейцил-тРНК синтетазу із Thermus thermophilus (ЛейРСТТ) виділено в гомогенному стані з використанням п'яти стадій очищення. Фермент охарактеризовано та отримано його кристали. Визначено молекулярну масу нативного і денатуро­ваного білка. Встановлено, що ЛейРСТТ являє собою мономер з молекулярною масою 101 кДа. Отриманому ферментові притаманна значна термостабільність і він зберігає 97 % аміноацилюючої активності після інкубації протягом 1 год при температурі 88 ° С Кристали ЛейРСТТ одержано методом дифузії парів із використанням як осаджувана розчину сульфату амонію.

References

[1] Jakubowski H, Goldman E. Editing of errors in selection of amino acids for protein synthesis. Microbiol Rev. 1992;56(3):412-29.
[2] Lin L, Hale SP, Schimmel P. Aminoacylation error correction. Nature. 1996;384(6604):33-4.
[3] Eriani G, Delarue M, Poch O, Gangloff J, Moras D. Partition of tRNA synthetases into two classes based on mutually exclusive sets of sequence motifs. Nature. 1990;347(6289):203-6.
[4] Cusack S, Berthet-Colominas C, H?rtlein M, Nassar N, Leberman R. A second class of synthetase structure revealed by X-ray analysis of Escherichia coli seryl-tRNA synthetase at 2.5 A. Nature. 1990;347(6290):249-55.
[5] Asahara H, Himeno H, Tamura K, Hasegawa T, Watanabe K, Shimizu M. Recognition nucleotides of Escherichia coli tRNA(Leu) and its elements facilitating discrimination from tRNASer and tRNA(Tyr). J Mol Biol. 1993;231(2):219-29.
[6] Cusack S. Eleven down and nine to go. Nat Struct Biol. 1995;2(10):824-31.
[7] Arnez JG, Moras D. Structural and functional considerations of the aminoacylation reaction. Trends Biochem Sci. 1997;22(6):211-6.
[8] Martinis SA, Plateau P, Cavarelli J, Florentz C. Aminoacyl-tRNA synthetases: a new image for a classical family. Biochimie. 1999;81(7):683-700.
[9] Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970;227(5259):680-5.
[10] Chen J, Li Y, Wang E, Wang Y. High-level expression and single-step purification of leucyl-tRNA synthetase from Escherichia coli. Protein Expr Purif. 1999;15(1):115-20.
[11] Mazauric MH, Reinbolt J, Lorber B, Ebel C, Keith G, Gieg? R, Kern D. An example of non-conservation of oligomeric structure in prokaryotic aminoacyl-tRNA synthetases. Biochemical and structural properties of glycyl-tRNA synthetase from Thermus thermophilus. Eur J Biochem. 1996;241(3):814-26.