Biopolym. Cell. 1999; 15(3):241-246.
Генно-інженерна біотехнологія
Експресія плазміди pEGFP у гепатоцитах мишей in vivo
1Шпилєва С. П., 1Андрієнко В. І., 1Топорова О. К., 1Єлисєєва Г. С., 1Аджаміян Ф., 1Жарова Л. Г., 1Лихачева Л. І., 1Кордюм В. А.
  1. Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
    Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, Україна, 03680

Abstract

Досліджено експресію гена GFP in vivo в гепатоцитах мишей. Як векторну молекулу використано транзиторну плазміду pEGFP-Cl, яку у складі ліпосом вводили безпосередньо в печінку тварин. Підібрано умови, коректного тестування напрацьованого білка GFP, які виключали можливість появи артефактного свічення в живих гепатоцитах. Зелений флюоресціюючий білок GFP був ідентифікований у цитоплазмі гепатоцитів мишей через 6, 17, 24 год і до 7 діб включно після введення матеріалу в орган.

References

[1] Morin JG, Hastings JW. Energy transfer in a bioluminescent system. J Cell Physiol. 1971;77(3):313-8.
[2] Prasher DC, Eckenrode VK, Ward WW, Prendergast FG, Cormier MJ. Primary structure of the Aequorea victoria green-fluorescent protein. Gene. 1992;111(2):229-33.
[3] Vanden Wymelenberg AJ, Cullen D, Spear RN, Schoenike B, Andrews JH. Expression of green fluorescent protein in Aureobasidium pullulans and quantification of the fungus on leaf surfaces. Biotechniques. 1997;23(4):686-90.
[4] Bokman SH, Ward WW. Renaturation of Aequorea gree-fluorescent protein. Biochem Biophys Res Commun. 1981;101(4):1372-80.
[5] Wang J, Holden DW, Leong SA. Gene transfer system for the phytopathogenic fungus Ustilago maydis. Proc Natl Acad Sci U S A. 1988;85(3):865-9.
[6] Chalfie M, Tu Y, Euskirchen G, Ward WW, Prasher DC. Green fluorescent protein as a marker for gene expression. Science. 1994;263(5148):802-5.
[7] Heim R, Cubitt AB, Tsien RY. Improved green fluorescence. Nature. 1995;373(6516):663-4.
[8] Zhang G, Gurtu V, Kain SR. An enhanced green fluorescent protein allows sensitive detection of gene transfer in mammalian cells. Biochem Biophys Res Commun. 1996;227(3):707-11.
[9] Heim R, Prasher DC, Tsien RY. Wavelength mutations and posttranslational autoxidation of green fluorescent protein. Proc Natl Acad Sci U S A. 1994;91(26):12501-4.
[10] Sheen J, Hwang S, Niwa Y, Kobayashi H, Galbraith DW. Green-fluorescent protein as a new vital marker in plant cells. Plant J. 1995;8(5):777-84.
[11] Kostetsky IE, Shpilevaya SP, Likhacheva LI, Zharova LC, Irodov DM, Kirillova VS, Kordium VA. Expression of Escherichia coli b-Galactosidase in murine hepatocytes. Biopolym. Cell. 1989; 5(2):51-58
[12] Bilich KM, Irodov DM, Kordium VA. Some ultrastructural aspects of direct injection of liposomes with inclosed plasmid DNA into mice liver. Biopolym. Cell, 1990;6(1):73-82
[13] Seglen PO. Effects of amino acids, ammonia and leupeptin on protein synthesis and degradation in isolated rat hepatocytes. Biochem J. 1978;174(2):469-74.
[14] Ugolev AT, Luk'yanova LD, Dudchenko AM. Obtaining isolated hepatocytes and the general characteristics of their functional-metabolic status. Hepatocyte. Functional-metabolic properties. Nauka. 1985. Pp. 9-37.
[15] Benvenisty N, Reshef L. Direct introduction of genes into rats and expression of the genes. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83(24):9551-5.