Метиленовий синій: альтернативний багатоцільовий барвник для виявлення, аналізу та виділення нуклеїнових кислот
DOI:
https://doi.org/10.7124/bc.000487Анотація
Здійснено серію експериментів з використання метиленового синього (МС) замість інтеркалюючих барвників бромистого етидію (ЕВ) та. акридинового оранжевого (АО) для забарвлення, візуалізації та виділення ДНК і РНК. Показано, що МС переважає інші барвники у використанні для декількох цілей: 1) візуалізації гліоксильовано'і (хімічно денатурованої) РНК в агарозних гелях; 2) забарвлювання нуклеїнових кислот, які в подальшому будуть використані в експериментах з гібридизації; 3) виділення та очистки плазмідної ДНК ультрацентрифугуванням в CsCl. Знайдено, що за допомогою МС ДНК так само добре виявляється в гелях агарози або акриламіду, як і з використанням ЕВ і АО, а ДНК, забарвлена МС, може бути очищена із зрізів гелей агарози по протоколу «Gene Clean». Ці результати вказують на те, що МС є дуже ефективним барвником нуклеїнових кислот. Обговорюється його безпека іюрівняно з загальноприйнятними інтеркалюючими барвниками.Посилання
Ethidium Bromide MSDS (Report Number OHS60703). San Feandro: MDL Inform. Syst., 1994.
Acridine Orange MSDS (Report Number OHS60010). San Feandro: MDL Inform. Syst., 1994..
Methylene Blue MSDS (Report Number OHSl 9415). San Feandro: MDL Inform. Syst., 1994.
Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T, Irwin N. Molecular Cloning. A Laboratory Manual. New York: Cold Spring Ftarbor Fab. press, 1989. 325 p.
Herrin DL, Schmidt GW. Rapid, reversible staining of northern blots prior to hybridization. Biotechniques. 1988;6(3):196-7, 199-200.
Wilkinson M, Doskow J, Lindsey S. RNA blots: staining procedures and optimization of conditions. Nucleic Acids Res. 1991;19(3):679.
Carmichael GG. Molecular weight determinations of RNA by gel electrophoresis. Electrophoresis. 1980;1(2):78–82.
Thomas PS. Hybridization of denatured RNA transferred or dotted nitrocellulose paper. Methods Enzymol. 1983;100:255-66.
