Протеолітичний біосенсор на основі рН-чутливих польових транзисторів. 1. Вивчення порівняльних характеристик нативного і іммобілізованого трипсину для створення ензимобіосенсора
DOI:
https://doi.org/10.7124/bc.000429Анотація
Проаналізовано методи іммобілізації трипсину з точки зору сенсорної технології. Здійснено іммобілізацію трипсину на напівпровідникову поверхню шляхом поперечної зшивки у білковій мембрані в парах глутарового альдегіду (ТА). Підібрано оптимальні умови цього процесу: співвідношення трипсин: БСА – 1:4; час інкубації в парах ГА 2 год при кімнатній температурі. Вивчено вплив стабілізуючих додатків гліцерину і сахарози на характеристики мембрани. Додавання 2,0–2,5 % гліцерину підвищує активність мембран і рівень адгезії до поверхні. Проведено порівняльне дослідження каталітичних характеристик вільного і іммобілізованого трипсину, таких як Км, залежність активності ферменту від рН, буферної ємності та іонної сили аналізованого розчину. Результати обговорюються з позиції можливого використання отриманих мембран як чутливого елемента протеолітичного біосенсора.Посилання
Darbre A. Practical protein chemistry. Jone Wiley and Sons 1986, 141 p.
Dixon M, Webb EC. Enzymes. 3nd ed. New York, Acad. Press, 1979; 1116 p.
Tarasevich MR, Bogdanovskaya VA. Modified electrodes and sensors based on them. Zh vsesoyuzhnogo khim obschestva im D I Mendeleeva. 1989;34(3):349.
Immobilized enzymes. Ed. K. Mosbach. Methods Enzymol. 1976; 44:661—663.
Fu H, Anzai J, Osa T, Matsuo T. Proteolytic enzyme sensors using an ion-sensitive field effect transistor. Chem Pharm Bull (Tokyo). 1988;36(3):1190-3.
Immobilised cells and enzymes — A practical approach: Edited by J Woodward. IRL Press, Oxford. 1985. 177 p.
Soldatkin AP, Boubryak OA, Starodub NF, El’skaya AV, Sandrovsky AK, Shul’ga AA, Strikha VI. Urease biosensor based on field effect transistor. Design features and performance in a model conditions. Electrochemistry (Moskow). 1993; 29(3):315-9.
Soldatkin AP, El’skaya AV, Shul’ga AA, Netchiporouk LI, Nyamsi Hendji AM, Jaffrezic-Renault N, et al. Glucose-sensitive field-effect transistor with additional Nafion membrane. Anal Chim Acta. 1993;283(2):695–701.
Kimura J, Kawana Y, Kuriyama T. An immobilized enzyme membrane fabrication method using an ink jet nozzle. Biosensors. 1989;4(1):41–52.
Starodub NF, Khustochka LN, Lazarenko AV, Boubryak OA, Terent’ev AG, El’skaya AV. Integration of the biological material in the electrochemical biosensor device. Zh Anal Khim. 1990; 45(7):1433-40
Dawson RMC, Elliott DC, Elliot WH, Jones KM. Data for Biochemical research. Clarendon Press Oxford 1986.
Goronovsky IT, Nazarenko YuP, Nekryach EF. Short handbook of chemistry. Kiev: Naukova dumka, 1965; 835 p.
