Модифікація методу виділення РНК з гуанідинійтіоціанатом і вакуумне перенесення на мембрани покращують можливості аналізу високомолекулярних транскриптів з клітин тварин
DOI:
https://doi.org/10.7124/bc.0002B4Анотація
Запропоновано модифікований метод виділення РНК із клітин тварин з використанням гуанідінійтіоціанату, що дозволяє одержувати високомолекулярні препарати як з ядра, так і з цитоплазми. Розроблена схема швидкого переносу PHK під дією вакууму з агарозного гелю після електрофоретичного розділення на сорбуючі мембрани. Гібридизацією з радіоактивними зондами показана ефективність поєднання вказаних підходів для аналізу розмірів та розподілу транскриптів індивідуальних генів між ядром і цитоплазмою.Посилання
Maniatis T, Fritsch EF, Sambrook J. Molecular cloning: a laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor Lab, 1982; 545 p.
Transcription and translation — a practical approach: Edited by B D Hames and S J Higgins. IRL Press, Oxford. 1984. 328 p.
DNA Cloning: a practical approach. Ed. Glover DM. Vol. III. Oxford University Press. 1987; 272 p.
Cathala G, Savouret JF, Mendez B, West BL, Karin M, Martial JA, Baxter JD. A method for isolation of intact, translationally active ribonucleic acid. DNA. 1983;2(4):329-35.
Locker J. Analytical and preparative electrophoresis of RNA in agarose-urea. Anal Biochem. 1979;98(2):358-67.
Zaĭtsev IZ, Iakovlev AG. Vacuum transfer of DNA to filters for detecting interindividual polymorphism by the Southern blotting hybridization method. Biull Eksp Biol Med. 1983;96(10):84-6.
Olszewska E, Jones K. Vacuum blotting enhances nucleic acid transfer. Trends Genet. 1988;4(4):92-4.
Prima VI, Clochko TA, Obolenskaya MYu, Ivanov PL, Ryskov AP, Platonov OM. Synchronous changes of c-fos RNA and B2+mRNAx concentrations during prereplicative period in regenerating rat liver. Biopolym Cell. 1989; 5(6):83-86.
Raymond Y, Shore GC. The precursor for carbamyl phosphate synthetase is transported to mitochondria via a cytosolic route. J Biol Chem. 1979;254(19):9335-8.
Southern EM. Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electrophoresis. J Mol Biol. 1975;98(3):503-17.
Bittner M, Kupferer P, Morris CF. Electrophoretic transfer of proteins and nucleic acids from slab gels to diazobenzyloxymethyl cellulose or nitrocellulose sheets. Anal Biochem. 1980;102(2):459-71.
