Синтез на однонитковій кільцевій ДНК фага М13, який спрямовується ДНК-полімеразою вірусу ядерного поліедрозу тутового шовкопряда
DOI:
https://doi.org/10.7124/bc.000188Анотація
З лялечок шовковичного шовкопряда Bombух mori, інфікованих вірусом ядерного поліедрозу (ВЯП), виділено вірусоспеціфічну ДНК-полімеразу (ВЯП-полімеразу), ВЯП-полімераза представляє собою поліпептид з молекулярною масою 136 000 і коефіцієнтом седиментації 6,3 S. Фермент надає перевагу як матриці poly (dA) із затравкою (dT)10 і не активний при використанні poly (А). Частково очищена ВЯП-полімераза активна на однонитчастій кільцевій ДНК фага М13 за відсутності затравки. Здатність до синтезу на ДНК М13 обумовлена присутністю в препаратах ВЯП-полімерази Mg2+-залежної ендонуклеази, специфічної щодо двунитчастих ділянок ДНК. Ендонуклеаза присутня в препаратах ВЯП-полімерази після фракціонування екстракту інфікованих лялечок сульфатом амонію, хроматографії на фосфоцелюлозі і оксиапатиті, але може бути відокремлена від ВЯП-полімерази при ультрацентрифугуванні в градієнті концентрації гліцерину за присутності 200 мМ фосфату калію. При зниженні концентрації солі ВЯП-полімераза і ендонуклеаза виявляють тенденцію до агрегації.Посилання
Miller LK, Jewell JE, Browne D. Baculovirus induction of a DNA polymerase. J Virol. 1981;40(1):305-8.
Wang X, Kelly DC. Baculovirus replication: purification and identification of the Trichoplusia ni nuclear polyhedrosis virus-induced DNA polymerase. J Gen Virol. 1983; 64(10):2229-2236.
Zinder ND, Boeke JD. The filamentous phage (Ff) as vectors for recombinant DNA--a review. Gene. 1982;19(1):1-10.
Zasloff M, Ginder GD, Felsenfeld G. A new method for the purification and identification of covalently closed circular DNA molcules. Nucleic Acids Res. 1978;5(4):1139-52.
Onodera K, Komano T, Himeno M, Sakai F. The nucleic acid of nuclear-polyhedrosis virus of the silkworm. J Mol Biol. 1965;13(2):532-9.
Mikhailov VS, Gulyamov DB. Changes in DNA polymerase alpha, beta, gamma activities during early development of the teleost fish Misgurnus fossilis (loach). Eur J Biochem. 1983;135(2):303-6.
Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970;227(5259):680-5.
Oakley BR, Kirsch DR, Morris NR. A simplified ultrasensitive silver stain for detecting proteins in polyacrylamide gels. Anal Biochem. 1980;105(2):361-3.
Mikhailov VS, Guliamov DB. Isolation of two forms of DNA polymerase alpha from roe of loach. Physico-chemical properties of the isoenzymes. Biokhimiia. 1983;48(9):1530-7.
Ryndich AV, Sutugina LP, Kavsan VM etc. DNA polymerase activity of nuclear polyhedrosis virus large Wax moth. Dokl AN SSSR ser B, 1975; (4):347-349.
Mikhailov B, Atayeva DO, Marlyev KA, Kullyev PK. Isolation of the replication complex comprising a DNA polymerase ? primase and a DNA of the silkworm silkworm Bombyx mori. Dokl AN SSSR. 1984; 275(2):502-505.
