Створення хроматографічного сорбенту на основі іммобілізованих одноланцюгових антитіл для афінного виділення рекомбінантного IFN-β1b людини
DOI:
https://doi.org/10.7124/bc.0008ECКлючові слова:
інтерферон-β1b, одноланцюгові антитіла, імуноафінне очищення, целюлозозв’язувальний домен.Анотація
Мета. Розробити лабораторний метод створення імуноафінного хроматографічного сорбенту для виділення та очищення рекомбінантного IFN-β1b людини. Методи. Використовуючи послідовності ДНК, які кодують ScFv специфічні до hIFN-β1b, та целюлозозв’язувальний домен (CBD) Clostridium thermocellum, створено ген химерного протеїну ScFvbINF-CBD. Проведено експресію створеного химерного протеїну в клітинах Escherichia coli. Цільовий білок одержували у розчинній, функціонально активній формі шляхом ренатурації з бактеріальних тілець включення in vitro. ScFvbINF-CBD іммобілізували на хітиновому носії. Результати. Введення CBD до складу химерного білка забезпечує орієнтовану, не ковалентну іммобілізацію ScFvbINF-CBD на хроматографічній матриці. За допомогою створеного імуноафінного сорбенту було виділено rhIFN-β1b зі складної суміші білків, одержаної після його ренатурації з тілець включення, з чистотою більше ніж 89 %. Висновки. Створений імуноафінний хроматографічний сорбент дозволяє виділяти рекомбінантний IFN-β1b людини зі складних сумішей білків.Посилання
Blank K, Lindner P, Diefenbach B, Plückthun A. Self-immobilizing recombinant antibody fragments for immunoaffinity chromatography: generic, parallel, and scalable protein purification. Protein Expr Purif. 2002;24(2):313–22.
Berry MJ, Davies J, Smith CG, Smith I. Immobilization of Fv antibody fragments on porous silica and their utility in affinity chromatography. J Chromatogr. 1991;587(2):161-9.
Compston A, Coles A. Multiple sclerosis. Lancet. 2008;372(9648):1502-17.
Minagar A. Current and future therapies for multiple sclerosis. Scientifica (Cairo). 2013;2013:249101.
Pavlova MV, Nikolaev IuS, Irodov DM, Okunev OV, Kordium VA, Gil'chuk PV. [Characterization of a panel of mouse single-chain antibodies against recombinant human interferon beta1b]. Tsitol Genet. 2008;42(4):3-11.
Gilchuk PV, Okunev OV, Irodov DM, Pavlova MV, Yakovenko OYa. Immobilized single chain antibodies for affinity purification of recombinant human IFN-α2b. Biopolym Cell. 2006; 22(2):157–61.
Studier FW. Protein production by auto-induction in high density shaking cultures. Protein Expr Purif. 2005;41(1):207-34.
The Protein Protocols Handbook. Ed. Walker JM. Humana Press Inc. 2009 1984 p.
Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T. Molecular cloning: A laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor Lab. press, 1989.
Morag E, Lapidot A, Govorko D, Lamed R, Wilchek M, Bayer EA, Shoham Y. Expression, purification, and characterization of the cellulose-binding domain of the scaffoldin subunit from the cellulosome of Clostridium thermocellum. Appl Environ Microbiol. 1995;61(5):1980-6.
Bayer EA, Morag E, Lamed R. The cellulosome--a treasure-trove for biotechnology. Trends Biotechnol. 1994;12(9):379-86.
Lehtiö J, Sugiyama J, Gustavsson M, Fransson L, Linder M, Teeri TT. The binding specificity and affinity determinants of family 1 and family 3 cellulose binding modules. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003;100(2):484-9.
Guo JQ, You SY, Li L, Zhang YZ, Huang JN, Zhang CY. Construction and high-level expression of a single-chain Fv antibody fragment specific for acidic isoferritin in Escherichia coli. J Biotechnol. 2003;102(2):177–89.
Tormo J, Lamed R, Chirino AJ, Morag E, Bayer EA, Shoham Y, Steitz TA. Crystal structure of a bacterial family-III cellulose-binding domain: a general mechanism for attachment to cellulose. EMBO J. 1996;15(21):5739-51.
