Розробка послідовностей crRNA для оптимізації ефективності розщеплення MAD7

Анотація

Мета. Порівняння нативних та хімічно модифікованих синтетичних crRNA у комплексі з нуклеазою MAD7 для нокауту репортера в еукаріотичних клітинних лініях. Оцінка альтернативних форматів масивів crRNA на MAD7-опосередкованому мультиплексованому редагуванні генів в еукаріотичних клітинах. Висновки. Ми продемонстрували, що активність редагування на основі MAD7 залежить від синтетичних модифікацій crRNA, віддаючи перевагу стабілізуючим модифікаціям як на 5'-, так і на 3'-кінцях crRNA. Ефективна обробка масиву crRNA в одноцистронному форматі вимагає 5'-термінальних послідовностей з конфігурації full-DR. Потрібна подальша оптимізація всіх компонентів для підвищення системної активності в клітинах ссавців.