Дослідження структурно-функціональних властивостей імуногенного фрагмента Кі-67 антигену та отримання до нього полі- і моноклональних антитіл
DOI:
https://doi.org/10.7124/bc.0006EAКлючові слова:
білок Kі-67, антитіла, імуногістохімія, ДНК-зв'язувальна активністьАнотація
Дослідження особливостей функціонування асоційованих з пухлиною антигенів дає змогу розширити уявлення щодо молекулярних механізмів онкогенезу. Раніше нами ідентифіковано ядерний білок Kі-67 як один із автоантигенів меланоми людини, а кДНК імуногенного фрагмента Kі-67 антигену клоновано в рЕТ23d вектор та експресовано у клітинах бактерій. В представленій роботі рекомбінантний пептид Kі-67, очищений з лізатів клітин бактерій, використано як антиген для отримання полі- і моноклональних антитіл Одержані антитіла застосовано для визначення локалізації Kі-67 антигену в клітинах аденокарциноми молочної залози. Методом імунодот-блот-аналізу встановлено, що одержаному рекомбінантному фрагменту Kі-67 антигену розміром 18 кДа притаманні ДНК-зв'язувальні властивості.Посилання
Rodnin MV, Tykhonkova IO, Filonenko VV, Drobot LB, Matsuka GKh, Gout IT. Search and characterization of melanoma antigens with the use of serological identification of antigens by recombinant expression cloning. Biopolym Cell. 2000;16(5):339-344.
Gerdes J, Schwab U, Lemke H, Stein H. Production of a mouse monoclonal antibody reactive with a human nuclear antigen associated with cell proliferation. Int J Cancer. 1983;31(1):13-20.
Scholzen T, Gerdes J. The Ki-67 protein: from the known and the unknown. J Cell Physiol. 2000;182(3):311-22.
Scholzen T, Gerdes J. The Ki-67 protein: from the known and the unknown. J Cell Physiol. 2000;182(3):311-22.
Sawhney N, Hall PA. Ki67--structure, function, and new antibodies. J Pathol. 1992;168(2):161-2.
Brown DC, Gatter KC. Ki67 protein: the immaculate deception? Histopathology. 2002;40(1):2-11.
Pogrebnoy PV, Kukharenko AP, Tykhonkova IA, Pal'chevskiy SS, Savinskaya LA, Pogrebnaya AP, Valevka TI, Markeeva NV, Soldatkina, MA, Matsuka GKh, Gout IT, Filonenko VV. Generation and characterization of monoclonal antibodies to P70S6 kinase. Experimental Oncology. 1999; 21(3-4):232-8.
Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970;227(5259):680-5.
Szekeres G, Le Tourneau A, Benfares J, Audouin J, Diebold J. Effect of ribonuclease A and deoxyribonuclease I on immunostaining of Ki-67 in fixed-embedded sections. Pathol Res Pract. 1995;191(1):52-6.
