Нові антитіла проти RCD-8 як інструмент для вивчення процесивних тілець
DOI:
https://doi.org/10.7124/bc.00017CКлючові слова:
процесинг мРНК, декепінг, процесивні тільця, імуноцитохіміяАнотація
Мета. Розробити модельну систему для вивчення стану процесивних тілець як можливого показника активності mTOR-кінази в клітинах ссавців. Методи. Виділено поліклональні антитіла до одного з основних білків процесивних тілець – RCD-8 із застосуванням методу імуноцитохімії. Результати. Показано, що отримані антитіла розпізнають внутрішньоклітинні структури, надалі ідентифіковані як процесивні тільця. Білок, що детектується антитілами, локалізується разом з відомим маркером процесивних тілець (DCP1a) та частково – з маркером стресових гранул (CPEB). Висновки. На основі даних щодо зміни розмірів і кількості процесивних тілець у відповідь на обробку клітин відомими індукторами та інгібіторами утворення процесивних тілець доведено специфічність зазначених антитіл і підтверджено можливість їхнього використання для дослідження динаміки утворення процесивних тілець під контролем mTOR-залежного сигнального шляху.Посилання
Coller J., Parker R. Eukaryotic mRNA decapping Annu. Rev. Biochem 2004 73:861–890.
Cougot N., van Dijk E., Babajko S., Seraphin B. «Cap-tabolism» Trends Biochem. Sci 2004 29, N 8:436–444.
Buchan J.R, Parker R. Eukaryotic stress granules: the ins and outs of translation Mol. Cell 2009 36, N 6:932–941.
Wilusz C., Wormington M., Peltz S. The cap-to-tail guide to mRNA turnover Nat. Revs Mol. Cell Biol 2001 2, N 4:237–246.
Averous J., Proud C. G. When translation meets transformation: the mTOR story Oncogene 2006 25, N 48:6423– 6435.
Liu L., Li F., Cardelli J. A., Martin K. A., Blenis J., Huang S. Rapamycin inhibits cell motility by suppression of mTORmediated S6K1 and 4E-BP pathways Oncogene 2006 25, N 53:7029–7070.
Sun S., Rosenberg L. M., Wang X., Zhou Z., Yue P., Fu H., Khuri F. R. Activation of akt and eIF4E survival pathways by rapamycin-mediated mammalian target of rapamycin inhibition Cancer Res 2005 65, N 16:7052–7058.
Stinton L. M., Eystathioy T., Selak S., Chan E. K., Fritzler M. J. Autoantibodies to protein transport and messenger RNA processing pathways: endosomes, lysosomes, Golgi complex, proteasomes, assemblyosomes, exosomes, and GW bodies Clin. Immunol 2004 110, N 1:30–44.
Parker R., Sheth U. P bodies and the control of mRNA translation and degradation Mol. Cell 2007 25, N 5:635–646.
Garcia-Lozano J. R., Gonzales-Escribano M. F., Wichmann I., Nunez-Roldan A. Cytoplasmic detection of a novel protein containing a nuclear localization sequence by human autoantibodies Clin. Exp. Immunol 1997 107, N 3:501–506.
Yu J. H., Yang W.-H., Gulich T., Bloch K. D., Bloch D. Ge-1 is a central component of the mammalian cytoplasmic mRNA processing body RNA 2005 11, N 12:1795–1802.
Bloch D. B., Gulick T., Bloch K. D., Yang W.-H. Processing body autoantibodies reconsidered RNA 2006 12, N 5:707–709.
Fenger-Gron M., Fillman C., Norrild B., Lykke-Andersen J. Multiple processing body factors and the ARE binding protein TTP activate mRNA decapping Mol. Cell 2005 20, N 6:905–915.
Nemazanyy I., Breus O., Gout I., Filonenko V., Panasyuk G. Generation and characterization of monoclonal antibodies to mTOR kinase Hybridoma 2008 27, N 5:395–399.
Wilczynska A., Aigueperse C., Kress M., Dautry F., Weil D. The translational regulator CPEB1 provides a link between dcp1 bodies and stress granules J. Cell Sci 2005 118, N 5:981–992.
Mollet S., Cougot N., Wilczynska A., Dautry F., Kress M., Bertrand E., Weil D. Translationally repressed mRNA transiently cycles through stress granules during stress Mol. Biol. Cell 2008 19, N 10:4469–4479.
Cavigelli M., Li W., Lin A., Su B., Yoshioka K., Karin M. The tumor promoter arsenite stimulates AP-1 activity by inhibiting a JNK phosphatase The EMBO J 1996 15, N 22:6269–6279.
