Одержання рекомбінантного шаперону GroEL і його имунологічна крос-реактивність з Hsp60
DOI:
https://doi.org/10.7124/bc.000724Ключові слова:
GroEL, Hsp60, іонообмінна хроматографія, гель-фильтрація, поліклональні антитіла, аутоімунні патології людиниАнотація
Описано метод одержання і очищення рекомбінантного шаперону GroEL (прокаріотного гомолога еукаріотного шаперону Hsp60), що включає експресію білка в клітинах Escherichia coli з наступним градієнтним висолюванням з лізату клітин-продуцентів, гель-фільтрацією на сефакрилі-SZQO та іонообмінною хроматографією на MonoQ HR 5/5. Такий метод дозволив ефективно напрацювати білок GroEL у препаративних кількостях, який потім використовували для отримання анmu-GroEL антитіл і синтезу афінної колонки. Показано імуно логічний перехрест афінно очищених поліклональних анти-GroEL антитіл з білком родини Hsp60 у лізатах органів і клітин різних видів ссавців — від миші до людини, що дозволяє використовувати ці антитіла при вивченні змін рівня експресії і клітинної локалізації Hsp60 в разі аутоімунних і ракових патологій людини.Посилання
Thomas PJ, Qu BH, Pedersen PL. Defective protein folding as a basis of human disease. Trends Biochem Sci. 1995;20(11):456-9.
Benjamin IJ, McMillan DR. Stress (heat shock) proteins: molecular chaperones in cardiovascular biology and disease. Circ Res. 1998;83(2):117-32.
Hartl FU. Molecular chaperones in cellular protein folding. Nature. 1996;381(6583):571-9.
Hutter MM, Sievers RE, Barbosa V, Wolfe CL. Heat-shock protein induction in rat hearts. A direct correlation between the amount of heat-shock protein induced and the degree of myocardial protection. Circulation. 1994;89(1):355-60.
Benjamin IJ, Jalil JE, Tan LB, Cho K, Weber KT, Clark WA. Isoproterenol-induced myocardial fibrosis in relation to myocyte necrosis. Circ Res. 1989;65(3):657-70.
Sreedhar AS, Csermely P. Heat shock proteins in the regulation of apoptosis: new strategies in tumor therapy: a comprehensive review. Pharmacol Ther. 2004;101(3):227-57.
Hendrick JP, Hartl FU. Molecular chaperone functions of heat-shock proteins. Annu Rev Biochem. 1993;62:349-84.
Ellis RJ, van der Vies SM. Molecular chaperones. Annu Rev Biochem. 1991;60:321-47.
Xu Q, Schett G, Seitz CS, Hu Y, Gupta RS, Wick G. Surface staining and cytotoxic activity of heat-shock protein 60 antibody in stressed aortic endothelial cells. Circ Res. 1994;75(6):1078-85.
Kaur I, Voss SD, Gupta RS, Schell K, Fisch P, Sondel PM. Human peripheral gamma delta T cells recognize hsp60 molecules on Daudi Burkitt's lymphoma cells. J Immunol. 1993;150(5):2046-55.
Soltys BJ, Gupta RS. Cell surface localization of the 60 kDa heat shock chaperonin protein (hsp60) in mammalian cells. Cell Biol Int. 1997;21(5):315-20.
Belles C, Kuhl A, Nosheny R, Carding SR. Plasma membrane expression of heat shock protein 60 in vivo in response to infection. Infect Immun. 1999;67(8):4191-200.
Sarto C, Binz PA, Mocarelli P. Heat shock proteins in human cancer. Electrophoresis. 2000;21(6):1218-26.
Maniatis T, Fritsch EF, Sambrook J. Molecular cloning: a laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor Lab, 1982; 545 p.
Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970;227(5259):680-5.
Bradford MM. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 1976;72:248-54.
Sidorik LL, Gudzera OI, Dragovoz VA, Tukalo MA, Beresten SF. Immuno-chemical non-cross-reactivity between eukaryotic and prokaryotic seryl-tRNA synthetases. FEBS Lett. 1991;292(1-2):76-8.
Matsiota P, Druet P, Dosquet P, Guilbert B, Avrameas S. Natural autoantibodies in systemic lupus erythematosus. Clin Exp Immunol. 1987;69(1):79-88.
Adib-Conquy M, Avrameas S, Ternynck T. Monoclonal IgG and IgM autoantibodies obtained after polyclonal activation, show reactivities similar to those of polyclonal natural autoantibodies. Mol Immunol. 1993;30(2):119-27.
Favorova OO, Zargarova TA, Rukosuyev VS, Beresten SF, Kisselev LL. Molecular and cellular studies of tryptophanyl-tRNA synthetases using monoclonal antibodies. Remarkable variations in the content of tryptophanyl-tRNA synthetase in the pancreas of different mammals. Eur J Biochem. 1989;184(3):583-8.
