Конструювання штамів — надпродуцентів формальдегіддегідрогенази метилотрофних дріжджів Hansenula polymorpha
DOI:
https://doi.org/10.7124/bc.000710Ключові слова:
глутатіонзалежна формальдегіддегідрогеназа, метилотрофні дріжджі <em>Hansenula polymorpha</em>, генно-інженерне конструюванняАнотація
Для генно-інженерного конструювання надпродуцента глутатіонзалежної формальдегіддегідрогенази (ФдДГ) обрано термотолерантні метилотрофні дріжджі Н. polymorpha NCYC 495 (leul-l). Ген FLD1 з власним промотором введено у плазміду інтегративного типу pYTl, яка містила ген LEU2 Saccharomyces cerevisiae, з подальшим включенням цього гена у геном штаму-реципіента leul-I. Здійснено селекцію інтегративних трансформантів за ознаками прототрофності по лейцину та резистентності до підвищених концентрацій формальдегіду (до 15 мМ) у ростовому середовищі. Визначено оптимальні умови культивування штамів для досягнення максимального рівня синтезу ФдДГ. Відібрано кращий трансформант як перспективний продуцент ФдДГ з активністю до 4 мкмоль·хв–1· мг–1 білка у безклітинному екстракті.Посилання
Hansen H, Hollenberg CP. Hansenula polymorpha (Pichia angusta). In: Nonconventional Yeasts in Biotechnology . Springer 1996;293–311.
Aggelis G, Margariti N, Kralli C, Flouri F. Growth of Candida boidinii on methanol and the activity of methanol-degrading enzymes as affected from formaldehyde and methylformate. J Biotechnol. 2000;80(2):119-25.
Formaldehyde. In: Environmental Health Criteria 89. Geneva: World Health Organization, 1989. (Polish Transl: Formaldehyd. Kryteria zdrowne srodowiska. T. 89. Jydu: Instytut Medycyny Pracy, 1993 1-191.
Szende B, Tyih?k E, Sz?k?n G, K?tay G. Possible Role of Formaldehyde in the Apoptotic and Mitotic Effect of 1-Methyl-Ascorbigen. Pathol Oncol Res. 1995;1(1):38-42.
Tyihak E, Trezl L, Szende B. Formaldehyde Cycle and the Phases of Stress Syndrome. Ann NY Acad Sci.; 1998;851:259-70.
Gonchar MV. [Alternative mechanisms of detoxication of formaldehyde, formate, and hydrogen peroxide in methylotrophic yeasts]. Mikrobiol Z. 2000;62(1):30-9.
Maidan NN, Gonchar MV, Sibirny AA. Oxidation of exogenous formaldehyde in methylotrophic and nonmethylotrophic yeast cells. Biochemistry (Mosc). 1997;62(6):636-40.
Feron VJ, Til HP, de Vrijer F, Woutersen RA, Cassee FR, van Bladeren PJ. Aldehydes: occurrence, carcinogenic potential, mechanism of action and risk assessment. Mutat Res. 1991;259(3-4):363-85.
Yu PH. Deamination of methylamine and angiopathy; toxicity of formaldehyde, oxidative stress and relevance to protein glycoxidation in diabetes. J Neural Transm Suppl. 1998;52:201-16.
Stasyk OV, Ksheminskaya GP, Kulachkovskii AR, Sibirnyi AA. Mutants of the methylotrophic yeast Hansenula polymorpha with impaired catabolite repression. Mikrobiologiia. 1997; 66(6):755-60.
Shen S, Sulter G, Jeffries TW, Cregg JM. A strong nitrogen source-regulated promoter for controlled expression of foreign genes in the yeast Pichia pastoris. Gene. 1998;216(1):93-102.
Baerends RJ, Sulter GJ, Jeffries TW, Cregg JM, Veenhuis M. Molecular characterization of the Hansenula polymorpha FLD1 gene encoding formaldehyde dehydrogenase. Yeast. 2002;19(1):37-42.
Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T. Molecular cloning: A laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor Lab. press, 1989. 452 p.
Faber KN, Haima P, Harder W, Veenhuis M, AB G. Highly-efficient electrotransformation of the yeast Hansenula polymorpha. Curr Genet. 1994;25(4):305-10.
