Вивчення впливу різних концентрацій індуктора на вихід альфа- 2b інтерферону людини в системі експресії на основі РНК- полімерази фага Т7 у клітинах Escherichia coli
DOI:
https://doi.org/10.7124/bc.000675Анотація
Біосинтез альфа-2b інтерферону людини (ІФН) у клітинах Е. coli BL21 (DE3), які несуть плазміду рЕТ-αІФН, індукували різними (від 0,01 до 10 мМ) концентраціями ізопропіл-β-D-тіогалактозиду (ІПТГ). Плазміда рЕТ-αІФН містить штучний ген ІФН під контролем промотора гена 10 фага Т7. Ген РНК-полімерази фага Т7 знаходиться в хромосомі клітин Е. coli BL21 (DE3) під контролем lac-UV5 промотора Е. coli Виявлено, що значення мінімальної концентрації ІПТГ, яка забезпечує ефективну експресію цільового білка, зростають із зниженням температури культивування продуцента після індукції. Так, при 37 °С повна індукція досягається внесенням до середовища ІПТГ у кінцевій концентрації 0,06 мМ, а при 21 °С–0,1 мМ. Показано, що зниження концентрації індуктора до 0,01 мМ не сприяє накопиченню ІФН у розчинній формі при культивуванні продуцента при температурі 37 °С. Також визначено, що ІПТГ у кінцевій концентрації до 2 мМ не чинить негативного впливу на літичний розвиток бактеріофага лямбда і інфіковані їм клітини, що містять плазміду, лізуються, в результаті чого рекомбінантний білок у розчинній формі накопичується безпосередньо в культуральному середовищі. Мінімальна концентрація ІПТГ, яка забезпечує максимальний вихід ІФН при цьому способі його отримання, складає 0,2 мМ.Посилання
Balb?s P. Understanding the art of producing protein and nonprotein molecules in Escherichia coli. Mol Biotechnol. 2001;19(3):251-67.
Friehs K, Reardon KF. Parameters influencing the productivity of recombinant E. coli cultivations. Adv Biochem Eng Biotechnol. 1993;48:53-77.
Studier FW, Moffatt BA. Use of bacteriophage T7 RNA polymerase to direct selective high-level expression of cloned genes. J Mol Biol. 1986;189(1):113-30.
Sawyer JR, Schlom J, Kashmiri SV. The effects of induction conditions on production of a soluble anti-tumor sFv in Escherichia coli. Protein Eng. 1994;7(11):1401-6.
Sriubolmas N, Panbangred W, Sriurairatana S, Meevootisom V. Localization and characterization of inclusion bodies in recombinant Escherichia coli cells overproducing penicillin G acylase. Appl Microbiol Biotechnol. 1997;47(4):373-8.
Waters S, Neujahr HY. A fermentor culture for production of recombinant phenol hydroxylase. Protein Expr Purif. 1994;5(6):534-40.
Bowden GA, Georgiou G. Folding and aggregation of beta-lactamase in the periplasmic space of Escherichia coli. J Biol Chem. 1990;265(28):16760-6.
Donovan RS, Robinson CW, Glick BR. Optimizing the expression of a monoclonal antibody fragment under the transcriptional control of the Escherichia coli lac promoter. Can J Microbiol. 2000;46(6):532-41.
Yang QH, Wu CL, Lin K, Li L. Low concentration of inducer favors production of active form of 6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase in Escherichia coli. Protein Expr Purif. 1997;10(3):320-4.
Galloway CA, Sowden MP, Smith HC. Increasing the yield of soluble recombinant protein expressed in E. coli by induction during late log phase. Biotechniques. 2003;34(3):524-6.
Slavchenko IYu, Boreyko EV, Vorobey NV, Chernykh SI, Kordyum VA. Overproduction of human α-2b interferon in a soluble form in Escherichia coli cells using the bacteriophage T7 RNA polymerase-base expression system. Biopolym Cell. 2003; 19(4):367-373.
Slavchenko IYu, Boreyko EV, Gavrysh TG, Kostyuchenko IP, Kordyum VA. Biosynthesis of human basic fibroblast growth factor in soluble form in Escherichia coli and its purification. Biopolym Cell. 2003; 19(2):179-184.
Slavchenko IYu, Boreyko EV, Vorobey NV, Gavrysh TG, Pehota EN, Kordyum VA. Overexpression and purification of methionine aminopeptidase from Escherichia coli. Biopolym Cell. 2003; 19(3):274-280.
