Характеристика епітопів М-вірусу картоплі з використанням синтетичних пептидів
DOI:
https://doi.org/10.7124/bc.0005CEАнотація
Після гідролізу білка оболонки (БО) українського штаму Vl M-вірусу картоплі (PVM) термолізином виділено фрагмент 29AADFEGK35 , який розпізнавався двома моноклональними антитілами (MKA) M6D5 та M9G1, специфічними до PVM. Цей гептапептцд є С-кіщевою частиною триптичного тетрадекапептиду 22EARPLPTAADFEGK35 (П14), який розпізнавався тими самими MKA. Для визначення внеску негативно заряджених дикарбонових амінокислот у формування комплексу антиген–антитіло синтезовано синтетичні пептиди, що повторюють послідовності триптичного (П14) та термолізинового (П7) фрагментів, а дгакож гептапептиди, які містили заміни Asp31 та Glu33 на аланін. Усі синтетичні гептапептиди слабко взаємодіяли з обома MKA в непрямому ІФА. Ці пептиди використовували як інгібітори взаємодії MKA-БО і МКА-П14. Результати інгібування ІФА показали, що: 1) однакові концентрації пептидів ефективніше інгибують взаємодію MKA з П14, ніж із БО; 2) заміна заряджених амінокислот, особливо заміна Asp31 , значно зменшує здатність пептидів пригнічувати взаємодію антиген–антитіло; 3) гептапептиди, що містять заміни амінокислот на аланін, ефективніше пригнічують взаємодію MKA M6D5 з антигенами та набагато слабше інгібують реакщір MKA M9G1 з тими самими антигенами. Таким чином, Asp31 та Glu33 по-різному впливають на формування комплексу антиген–антитіло.Посилання
Viter SS, Tkachenko TYu, Kolomietz LP, Radavsky YuL. Analysis of antigenic structure of Potato Virus M Ukrainian strains. Biopolym Cell. 2000; 16(4):312-9.
Nikolayeva OV, Novikov VK, Atabekov IG, Kaftanova AS. Changes in the antigenic properties of the potato virus M with progressive degradation of structural protein during isolation and storage. Sel'skokhozyaystvennaya biologiya. 1985; 10:75-8.
Tavantzis SM. Physicochemical properties of potato virus M. Virology. 1984;133(2):427-30.
Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970;227(5259):680-5.
Wu GJ, Bruening G. Two proteins from cowpea mosaic virus. Virology. 1971;46(3):596-612.
Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J Biol Chem. 1951;193(1):265-75.
Barany G, Merrifield RB. Solid-phase peptide synthesis. Peptides. Eds E. Gross, J. Meienhoter. New York: Acad, press, 1980. Vol. 2: 1-284.
J?rvek?lg L, S?ber J, Sinij?rv R, Toots I, Saarma M. Time-resolved fluoroimmunoassay of potato virus M with monoclonal antibodies. Ann Appl Biol. 1989;114(2):279-91.
Zavriev SK, Kanyuka KV, Levay KE. The genome organization of potato virus M RNA. J Gen Virol. 1991;72 ( Pt 1):9-14.
Muller S, Plaue S, Couppez M, Van Regenmortel MH. Comparison of different methods for localizing antigenic regions in histone H2A. Mol Immunol. 1986;23(6):593-601.
Joisson C, Kuster F, Plau? S, Van Regenmortel MH. Antigenic analysis of bean pod mottle virus using linear and cyclized synthetic peptides. Arch Virol. 1993;128(3-4):299-317.
Rajashankar KR, Ramakumar S. Pi-turns in proteins and peptides: Classification, conformation, occurrence, hydration and sequence. Protein Sci. 1996;5(5):932-46.
Benjamin DC, Berzofsky JA, East IJ, Gurd FR, Hannum C, Leach SJ, Margoliash E, Michael JG, Miller A, Prager EM, et al. The antigenic structure of proteins: a reappraisal. Annu Rev Immunol. 1984;2:67-101.
Al Moudallal Z, Briand JP, Van Regenmortel MH. Monoclonal antibodies as probes of the antigenic structure of tobacco mosaic virus. EMBO J. 1982;1(8):1005-10.
Blondel B, Crainic R, Fichot O, Dufraisse G, Candrea A, Diamond D, Girard M, Horaud F. Mutations conferring resistance to neutralization with monoclonal antibodies in type 1 poliovirus can be located outside or inside the antibody-binding site. J Virol. 1986;57(1):81-90.
Collawn JF, Wallace CJ, Proudfoot AE, Paterson Y. Monoclonal antibodies as probes of conformational changes in protein-engineered cytochrome c. J Biol Chem. 1988;263(18):8625-34.
