Заміна groEL гена Escherichia coli його гомологом із Sinorhizobium meliloti
DOI:
https://doi.org/10.7124/bc.000582Анотація
У роботі показано, що ген groEL S. meliloti, який кодує субодиниці шапероніна з молекулярною масою 60 кДа, компигменту є делецію гена groEL Е. coli, здійснену шляхом заміни groEL на nptll ген за допомогою трансдукції фагом Р1. При цьому для експресії гена groEL з S. meliloti в клітинах Е. coli використано плазміду з промотором арабінозного оперону Е. coli, що дозволило тонко регулювати синтез шаперонінів кількістю арабінози і глюкози в середовищі вирощування. Метод заміни хромосомного гена groEL на гетерологічний groEL дозволяє вивчати властивості гомологічних шаперонінів у клітині, яка не несе додатково температурочутливих иіаперонінів і, таким чином, уникнути небажаної взаємодії иіаперонінів різного походження і включення в один шаперонін гетерологічних субодиниць.Посилання
Hartl FU, Martin J. Molecular chaperones in cellular protein folding. Curr Opin Struct Biol. 1995;5(1):92-102.
McLennan NF, McAteer S, Masters M. The tail of a chaperonin: the C-terminal region of Escherichia coli GroEL protein. Mol Microbiol. 1994;14(2):309-21.
H?bner P, Dame G, Sandmeier U, Vandekerckhove J, Beyer P, Tadros MH. Molecular analysis of the Rhodobacter capsulatus chaperonin (groESL) operon: purification and characterization of Cpn60. Arch Microbiol. 1996;166(3):193-203.
Rusanganwa E, Gupta RS. Cloning and characterization of multiple groEL chaperonin-encoding genes in Rhizobium meliloti. Gene. 1993;126(1):67-75.
Ogawa J, Long SR. The Rhizobium meliloti groELc locus is required for regulation of early nod genes by the transcription activator NodD. Genes Dev. 1995;9(6):714-29.
Wallington EJ, Lund PA. Rhizobium leguminosarum contains multiple chaperonin (cpn60) genes. Microbiology. 1994;140 ( Pt 1):113-22.
Yerko VN, Lund PA. Gene cpn60-1 coding one of homologous chaperonins in Rhizobiuin leguminosarum is essential for cell life. Biopolym Cell. 1999; 15(6):516-21.
Gibson T. PhD thesis. Cambridge: Univ. press, 1997.
Ivic A, Olden D, Wallington EJ, Lund PA. Deletion of Escherichia coli groEL is complemented by a Rhizobium leguminosarum groEL homologue at 37 degrees C but not at 43 degrees C. Gene. 1997;194(1):1-8.
Guzman LM, Belin D, Carson MJ, Beckwith J. Tight regulation, modulation, and high-level expression by vectors containing the arabinose PBAD promoter. J Bacteriol. 1995;177(14):4121-30.
Miller JH. Short course in bacterial genetics. New York: Cold Spring Harbor Lab. press, 1992.
Sambrook J, Maniatis T, Fritsch EF. Molecular Cloning. A Laboratory Manual. New York: Cold Spring Harbor Lab. press, 1989.
Birnboim HC, Doly J. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA. Nucleic Acids Res. 1979;7(6):1513-23.
