Бактеріальна експресія повнорозмірних і усічених форм цитокіну ЕМАР-2 і цитокінподібного домену тирозил-тРНК синтетази ссавців
DOI:
https://doi.org/10.7124/bc.00056BАнотація
У вектор для бактеріальної експресії рЕТ32а клоновано і секвеновано вставки ДНК, що кодують повнорозмірні цитокін ЕМАР-2 і цитокінподібний домен тирозил-тРНК синтетазы (TyrRS) ссавців, а також їхні делетовані з СООН- і NH2-кінців форми. Отримано бактеріальну експресію всіх клонів, та для повнорозмірних форм здійснено афінне очищення до гомогенного стану, протеолітичне видалення константної частини злитих рекомбінантних білків, а також тестування їхньої біологічної активності у реакції індукції тканинного фактора. Повнорозмірна форма цитокінподібного домену TyrRS не взаємодіє з поліклональними антитілами до ЕМАР-2 у вестерн-блот-аналізі. Зроблено висновок щодо придатності одержаної панелі рекомбінантньїх білків для порівняльного вивчення локалізації функціонально важливих ділянок білківПосилання
Levanets OV, Naidenov VG, Woodmaska MI, Matsuka GH, Kornelyuk AI. Cloning of cDNA encoding C-terminal part of mammalian tyrosyl-tRNA synthetase using of PCR-amplified radioactive probe. Biopolym Cell. 1997; 13(2):121-6
Mirande M. Aminoacyl-tRNA synthetase family from prokaryotes and eukaryotes: structural domains and their implications. Prog Nucleic Acid Res Mol Biol. 1991;40:95-142.
Kleeman TA, Wei D, Simpson KL, First EA. Human tyrosyl-tRNA synthetase shares amino acid sequence homology with a putative cytokine. J Biol Chem. 1997;272(22):14420-5.
Kornelyuk AI, Tas MPR, Dubrovsky AL, Murray JC. Cytokine activity of the non-catalytic EMAP-2-like domain of mammalian tyrosyl-tRNA synthetase. Biopolym Cell. 1999; 15(2):168-72.
Wakasugi K, Schimmel P. Two distinct cytokines released from a human aminoacyl-tRNA synthetase. Science. 1999;284(5411):147-51.
Kao J, Ryan J, Brett G, Chen J, Shen H, Fan YG, Godman G, Familletti PC, Wang F, Pan YC, et al. Endothelial monocyte-activating polypeptide II. A novel tumor-derived polypeptide that activates host-response mechanisms. J Biol Chem. 1992;267(28):20239-47.
Kao J, Houck K, Fan Y, Haehnel I, Libutti SK, Kayton ML, Grikscheit T, Chabot J, Nowygrod R, Greenberg S, et al. Characterization of a novel tumor-derived cytokine. Endothelial-monocyte activating polypeptide II. J Biol Chem. 1994;269(40):25106-19.
Schwarz M, Lee M, Zhang F, Zhao J, Jin Y, Smith S, Bhuva J, Stern D, Warburton D, Starnes V. EMAP II: a modulator of neovascularization in the developing lung. Am J Physiol. 1999;276(2 Pt 1):L365-75.
Schwarz MA, Kandel J, Brett J, Li J, Hayward J, Schwarz RE, Chappey O, Wautier JL, Chabot J, Lo Gerfo P, Stern D. Endothelial-monocyte activating polypeptide II, a novel antitumor cytokine that suppresses primary and metastatic tumor growth and induces apoptosis in growing endothelial cells. J Exp Med. 1999;190(3):341-54.
Kao J, Fan YG, Haehnel I, Brett J, Greenberg S, Clauss M, Kayton M, Houck K, Kisiel W, Seljelid R, et al. A peptide derived from the amino terminus of endothelial-monocyte-activating polypeptide II modulates mononuclear and polymorphonuclear leukocyte functions, defines an apparently novel cellular interaction site, and induces an acute inflammatory response. J Biol Chem. 1994;269(13):9774-82.
Dubrovsky AL, Savinskaya LA, Kornelyuk AI. Cloning and bacterial expression of the cytokine-like noncatalytic domain of bovine tyrosyl-tRNA synthetase. Biopolym. Cell. 1998;14(5):449-452
Tas MP, Houghton J, Jakobsen AM, Tolmachova T, Carmichael J, Murray JC. Cloning and expression of human endothelial-monocyte-activating polypeptide 2 (EMAP-2) and identification of its putative precursor. Cytokine. 1997;9(8):535-9.
