Biopolymers and cell. 2010; 26 (6): 492 - 498
Розробка стратегії одержання рекомбінантних одноланцюгових антитіл проти поверхневих клітинних біомаркерів на прикладі антигену CD34 людини
Ю. С. Ніколаєв, О. Б. Горбатюк1, М. В. Цапенко
ГУ «Інститут генетичної та регенеративної медицини АМН України», Вул. Вишгородська, 67, Київ, Україна, 04114
1Київський національний університет імені Тараса Шевченка, Вул. Володимирська, 60, Київ, Україна, 01033
Антитіла проти поверхневих клітинних білків відіграють важливу роль у процедурах детектування, визначення стадії диференціації та виділення цільових популяцій клітин. Поверхневі клітинні антигени часто мають складну структуру зовнішньоклітинної ділянки молекули, яка характеризується сильним глікозилюванням та стабілізується дисульфідними зв’язками. При цьому одержання антитіл проти таких білків є нетривіальною задачею. Мета. Розробка стратегії одержання рекомбінантних антитіл проти поверхневих клітинних біомаркерів. Методи. Конструювання бібліотеки кДНК генів VH та VL імуноглобулінів тварин, імунізованих рекомбінантним антигеном, та використання біопенінгу на антиген-позитивних клітинах для збагачення вихідної бібліотеки послідовностями цільових антитіл. Детектування та відбір клонів – продуцентів цільових антитіл здійснювали за допомогою високопродуктивних автоматизованих систем. Результати. Одержано панель з п’яти антитіл, що розпізнають антиген на поверхні клітин CD34+, методами імуноцитохімії та проточної цитометрії. Висновки. Запропоновану стратегію можна використовувати для одержання антитіл проти поверхневих клітинних антигенів.
Ключові слова: CD34, фаговий дисплей, рекомбінантні одноланцюгові антитіла (ScFv), біопеннінг.